G-418硫酸盐 — 氨基糖苷类抗生素，稳定转染细胞株筛选金标准

一、产品基本信息

二、产品简介与核心优势

G-418硫酸盐（Geneticin，又称遗传霉素）是一种结构类似于庆大霉素B1的氨基糖苷类抗生素，来源于红橙小单孢菌（Micromonospora rhodorangea），是基因工程和细胞生物学研究中应用最广泛的选择性标记抗生素之一。

G-418通过特异性结合70S（原核）和80S（真核）核糖体，抑制蛋白质合成的延伸步骤，从而有效杀死缺乏抗性基因的细胞。其抗性基因（主要为neo基因，也称为nptII基因）编码氨基糖苷磷酸转移酶（APH(3)II），该酶通过共价修饰G-418分子，使其失活，从而使表达抗性基因的细胞获得在含G-418培养基中生长的能力。

G-418与新霉素同属氨基糖苷类抗生素，都可被neo基因产物失活，因此新霉素筛选的细胞都可以用G-418替代。与潮霉素B等其他筛选抗生素相比，G-418具有筛选范围广、稳定性好、性价比高等突出优势。

核心优势：

• 广谱筛选能力：有效筛选哺乳动物细胞、植物细胞、酵母、细菌等多种宿主细胞
  
• 抗性标记稳定：neo基因是目前最可靠的筛选标记之一，应用成熟
  
• 双重筛选功能：既可用于稳定转染细胞株的建立，也可用于已建立细胞株的维持培养
  
• 联合筛选兼容：可与潮霉素B、Zeocin等联用，构建双抗性细胞株
  
• 多领域应用：涵盖基因转移、基因敲除、抗性筛选、转基因动物等
  
• 抗病毒活性：研究表明G-418对登革热病毒2型（DENV-2）具有抑制活性，EC₅₀约3 μg/mL
  

三、作用机制

3.1 蛋白合成抑制

G-418通过与80S核糖体结合，特异性阻断蛋白质合成的延伸步骤，导致多肽链合成受阻，细胞因缺乏必需蛋白而死亡。

3.2 抗性机制（neo/nptII基因）

携带neo基因（又称nptII基因）的细胞表达氨基糖苷磷酸转移酶（APH(3)II），该酶通过以下方式赋予细胞抗性：

• 识别G-418分子中的特定氨基或羟基基团
  
• 催化ATP末端的磷酸基团转移至G-418分子
  
• 磷酸化后的G-418无法与核糖体有效结合
  
• 抗生素失活，细胞获得在含G-418培养基中生长的能力
  

3.3 抗性基因来源

neo基因主要来源于细菌转座子：

• Tn5转座子（最常用）
  
• Tn601（903）转座子
  

这些抗性基因可在真核细胞中高效表达，使G-418成为跨物种适用的筛选试剂。

四、主要应用领域

4.1 稳定转染哺乳动物细胞筛选（核心应用Ⅰ）

G-418是构建稳定转染细胞株最常用的选择性标记之一。将neo抗性基因与目的基因共同构建于同一载体，转染细胞后，使用含G-418的培养基筛选，仅成功整合外源基因的细胞能够存活。

筛选原理：

1. 转染携带neo基因的质粒至目标细胞
   
2. 转染48小时后，更换含G-418的筛选培养基
   
3. 未转染细胞在5-7天内死亡
   
4. 成功整合外源基因的细胞形成抗性克隆
   
5. 挑取克隆扩大培养，获得稳定表达细胞株
   

稳定细胞株建立流程：

• Day 0：细胞铺板（密度20-25%）
  
• Day 1：转染
  
• Day 3：更换含G-418筛选培养基（浓度根据杀灭曲线确定）
  
• 每3-4天：更换新鲜含药培养基
  
• Day 10-14：抗性克隆形成
  
• 克隆挑取：转移至24孔板扩大培养
  
• 维持培养：可使用1/2-1/3筛选浓度维持
  

4.2 植物细胞遗传转化筛选

在植物生物技术领域，nptII基因是转基因植物最常用的筛选标记之一。G-418用于筛选成功整合外源基因的植物细胞和组织。

推荐浓度：10 μg/mL起始

4.3 酵母与真菌筛选

G-418可有效抑制酵母和多种真菌的生长，用于酵母遗传操作中的转化子筛选。

推荐浓度：500 μg/mL起始

4.4 原核系统筛选

在大肠杆菌等原核表达系统中，含有neo基因的质粒可通过G-418抗性筛选快速鉴定阳性克隆。

4.5 双抗性细胞株构建

G-418常与潮霉素B、Zeocin™、Blasticidin S等联合使用，筛选同时表达两个独立外源基因的细胞株。

常见联用方案：

4.6 抗病毒研究

研究表明，G-418对登革热病毒2型（DENV-2）具有抑制活性：

• EC₅₀约3 μg/mL
  
• 显著减少病毒斑块形成和病毒滴度
  

五、杀灭曲线建立（确定最佳筛选浓度）

对于首次使用的细胞系，必须通过杀灭曲线确定最佳筛选浓度。

5.1 操作流程

5.2 哺乳动物细胞浓度梯度参考

建议设置以下浓度梯度（μg/mL）：

• 0（阴性对照）
  
• 50、100、200、400、600、800、1000、1200
  

5.3 不同细胞类型推荐起始浓度

六、实验方案

6.1 储存液配制

50 mg/mL G-418储存液（推荐浓度）：

配制步骤：

1. 称取适量G-418粉末
   
2. 加入无菌水或100 mM HEPES缓冲液（pH 7.3）溶解
   
3. 轻轻混匀至完全溶解（可37°C加热助溶）
   
4. 0.22 μm滤器过滤除菌（必须）
   
5. 分装于无菌冻存管
   
6. 储存条件：4°C可保存12个月，-20°C保存时间更长
   

HEPES缓冲液的优势：加入储存液不会改变细胞培养体系的pH值

重要提示：

• G-418不能高压灭菌，必须使用过滤除菌
  
• G-418不溶于乙醇、DMSO等有机溶剂
  
• 避免反复冻融，建议分装保存
  

6.2 稳定转染细胞筛选流程

转染后48小时开始筛选：

1. 传代：转染48h后，用含G-418的筛选培养基传代细胞
   
2. 维持筛选：每隔3-4天更换新鲜含药筛选培养基
   
3. 克隆形成：筛选10-14天后观察细胞克隆形成情况
   
4. 克隆挑取：挑取5-10个抗性克隆转移至24孔板
   
5. 扩大培养：稳定传代2-3次后，可降低G-418浓度至筛选浓度的1/2-1/3维持培养
   

6.3 稳定细胞株维持培养

已建立的稳定细胞株可用较低浓度的G-418维持培养：

• 维持浓度：筛选浓度的1/2-1/3
  
• 维持频率：每2-3代添加一次（或持续添加）
  
• 定期验证：定期检测外源基因表达水平
  

七、G-418 vs. 其他筛选抗生素：对比分析

选择建议：

• 哺乳动物细胞稳定转染（常规）：首选G-418，应用最成熟
  
• 快速筛选（3-5天）：选择嘌呤霉素
  
• 植物/酵母系统：选择潮霉素B或G-418
  
• 双抗性细胞株构建：G-418 + 潮霉素B联用
  

八、产品质量标准

湖南汇百益新材料有限公司提供的G-418硫酸盐产品严格执行以下质量标准：

湖南汇百益通过优化发酵与纯化工艺，将产物纯度稳定控制在≥98%，产品无菌、高活性，批次稳定性好，适合科研及工业用户的规模化使用。

包装规格：

• 实验室规格：100 mg、500 mg、1 g、5 g
  
• 工业规格：10 g、25 g、100 g
  
• 溶液形式：50 mg/mL无菌过滤溶液（5 mL、10 mL、20 mL）
  
• 可按客户需求定制包装
  

九、供应商介绍：湖南汇百益新材料有限公司

湖南汇百益新材料有限公司成立于2014年，位于湖南省怀化市洪江区工业园8号，拥有50,000平方米生产基地。公司是一家专注于生物基础试剂研发、生产与销售的“国家高新技术企业”、“湖南省专精特新企业”，拥有独立研发试验中心和生产基地，并已通过ISO 9001:2015质量管理体系认证。

公司先后获得“怀化市工程技术研究中心”“湖南师范大学化学生物学功能材料产学研基地”“创新创业大赛湖南省优秀企业”“湖南新材料企业”等一系列荣誉称号。

依托强大的生产平台与技术实力，公司可灵活提供OEM代工服务与个性化定制方案，如提纯、精制加工等，以满足客户多元化需求。旗下品牌“汇百试剂”，通过提供性能稳定可靠、品质媲美进口、成本更具优势的国产试剂，为生物医药、体外诊断、生物工程及科研机构等领域的客户提供基础材料解决方案，以实现关键生物基础试剂国产化替代与关键试剂本土化供应，切实解决中国生物试剂的供应瓶颈问题，并持续助力科研突破与产业创新升级。

公司研发、生产、销售各种高纯生化试剂，包括：

• 糖苷系列：IPTG、ONPG、PNPG、DTT、x-gal、x-gluc等
  
• 生物缓冲剂：Tricine、HEPES、MOPS、CAPS、TAPS、MES、BES等
  
• 表面活性剂与去污剂：SDS、SURFACTIN、EMPIGEN BB、CHAPS、SB-8至SB-18系列等
  
• 检测试剂：泛影酸钠、PCA钙、G-418硫酸盐、DTE、TCEP-HCl、PMSF、PNPP、ABTS、TMB、TMB-PS、鲁米诺、异鲁米诺、ABEI、MU-Gal、D-荧光素钾盐等
  
• 高纯生化试剂：DEPC、异硫氰酸胍、盐酸胍、PMSF、MTT、BSA、WST-8等
  

湖南汇百益提供的G-418硫酸盐产品具有以下突出优势：

• 高纯度：纯度≥98%，高活性（效价≥700 μg/mg），批次稳定性好
  
• 无菌品质：粉末高纯级，溶液形式已过滤除菌，可直接用于细胞培养
  
• 现货供应：常备库存，支持快速发货，满足紧急实验需求
  
• 规格灵活：提供粉末（100 mg至100 g）和溶液（50 mg/mL）多种规格
  
• 专业包装：采用密封、防潮包装，2-8°C冷藏运输保存
  
• 技术支持：专业技术团队提供全程使用指导与问题解答
  
• 源头工厂：自产自销，具备价格优势和供应稳定性
  

十、采购与使用建议

在采购G-418硫酸盐（CAS 108321-42-2）时，建议重点关注以下几点：

1. 纯度要求：对于细胞筛选等敏感应用，建议选择纯度≥98%、效价≥700 μg/mg的高品质产品，确保筛选效率和细胞状态。
   
2. 溶解方法：
   
3. 无菌处理：G-418不能高压灭菌，必须使用0.22 μm滤膜过滤除菌。
   
4. 工作浓度优化：
   
5. 储存条件：
   
6. 筛选关键要点：
   
7. 安全操作：
   

十一、联系我们

如需获取G-418硫酸盐（CAS 108321-42-2）的产品报价、样品或技术支持，请联系湖南汇百益新材料有限公司：

• 产品咨询：13319523173
  
• 订购邮箱：ivy@hnhbsj.com
  
• 官方网站：https://www.hbsjxcl.com/
  
• 公司地址：湖南省怀化市洪江区工业园8号
  

声明：本产品仅供科研使用，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读产品说明书，并遵守实验室安全操作规范。