潮霉素B— 氨基糖苷类抗生素，稳定转染细胞株筛选核心工具

一、产品基本信息

二、产品简介与核心优势

潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，于1953年首次从土壤中被分离获得，是生命科学研究中应用最广泛的选择性标记抗生素之一。

潮霉素B通过特异性干扰70S和80S核糖体的易位过程（translocation），并诱导对mRNA模板的错读，从而有效抑制蛋白质合成，杀死原核细胞（如细菌）、真核细胞（如酵母、真菌）以及高等哺乳动物细胞。

大肠杆菌来源的潮霉素抗性基因（hyg或hph）编码潮霉素B磷酸转移酶（Hygromycin B phosphotransferase），该酶能够将潮霉素B磷酸化，转化为不具有生物活性的产物，从而使细胞对潮霉素B产生抗性。基于这一原理，潮霉素B已成为基因工程和细胞生物学研究中筛选和维持培养稳定转染抗性基因细胞株的首选工具。

核心优势：

• 广谱抑制活性：有效抑制原核和真核细胞蛋白质合成，适用范围广泛
  
• 双重作用机制：除抑制翻译外，还可抑制30S核糖体亚基装配
  
• 抗性标记稳定：hph基因是目前最可靠的筛选标记之一，广泛应用于多个物种
  
• 联合筛选兼容：可与G418、Zeocin™、Blasticidin S等联用，构建双抗性细胞株
  
• 多领域应用：涵盖哺乳动物细胞、植物细胞、酵母、细菌稳定转染筛选
  
• 湖南汇百益源头供应：50000平生产基地，常备库存，品质稳定
  

三、作用机制

3.1 蛋白合成抑制

潮霉素B通过与70S（原核）或80S（真核）核糖体结合，特异性阻断延伸因子EF-2依赖的易位过程，抑制多肽链的延伸。此外，它还可诱导mRNA错读，进一步干扰翻译过程。

3.2 核糖体装配抑制

最新研究发现，潮霉素B具有双重作用靶点：除抑制蛋白合成外，还可抑制30S核糖体亚基的装配过程。研究表明，潮霉素B对翻译的IC₅₀为16 μg/mL，对核糖体亚基形成的IC₅₀为65 μg/mL。

3.3 抗性机制（hph基因）

携带hph（或hyg）抗性基因的细胞表达潮霉素B磷酸转移酶，该酶将潮霉素B磷酸化，使其失去核糖体结合能力，从而解除毒性。

抗性基因来源：

• Streptomyces hygroscopicus 来源的hph基因
  
• Escherichia coli和Klebsiella pneumoniae内质粒携带的hph基因（实验室常用）
  

四、主要应用领域

4.1 稳定转染哺乳动物细胞筛选（核心应用Ⅰ）

潮霉素B是构建稳定转染细胞株最可靠的选择性标记之一。将hph抗性基因与目的基因共同构建于同一载体，转染细胞后，使用含潮霉素B的培养基筛选，仅成功整合外源基因的细胞能够存活。

典型筛选浓度（哺乳动物细胞）：50-1000 μg/mL，常用200-500 μg/mL

常见细胞系推荐浓度：

4.2 植物细胞遗传转化筛选（核心应用Ⅱ）

在植物生物技术领域，潮霉素B广泛用于转基因植物的筛选和鉴定。农杆菌介导转化或基因枪转化后，植物组织在含潮霉素B的培养基上生长，仅成功整合hph基因的细胞才能发育成完整植株。

推荐浓度：细菌/植物细胞：20-200 μg/mL

4.3 酵母与真菌筛选

潮霉素B可有效抑制酵母和多种真菌的生长，用于酵母遗传操作中的转化子筛选。

推荐浓度：真菌：300-1000 μg/mL

4.4 双抗性细胞株构建

由于作用机制的差异，潮霉素B常与G418（Geneticin™）、Zeocin™、Blasticidin S等联合使用，筛选同时表达两个独立外源基因的细胞株，这对于研究蛋白相互作用或协同效应至关重要。

常见联用方案：

4.5 原核系统筛选

在大肠杆菌等原核表达系统中，含有hph基因的质粒可通过潮霉素B抗性筛选快速鉴定阳性克隆。

推荐浓度：细菌/植物细胞：20-200 μg/mL

五、抗性基因与其他抗生素的对比

5.1 常见筛选抗生素比较

六、实验方案

6.1 储存液配制

50 mg/mL潮霉素B储存液：

配制步骤：

1. 称取适量潮霉素B粉末
   
2. 加入PBS（0.01M）或去离子水溶解
   
3. 0.22 μm滤器过滤除菌（必须）
   
4. 分装于无菌冻存管
   
5. 储存条件：2-8°C冷藏，1年内稳定
   

重要提示：潮霉素B不能高压灭菌，必须使用过滤除菌。

6.2 杀灭曲线建立（确定最佳筛选浓度）

对于首次使用的细胞系，必须通过杀灭曲线确定最佳筛选浓度。

操作流程：

哺乳动物细胞浓度梯度参考：50、100、200、400、600、800、1000 μg/mL

6.3 稳定转染细胞筛选流程

转染后48小时开始筛选：

1. 传代：转染48h后，用含潮霉素B的筛选培养基传代细胞
   
2. 维持筛选：每隔3-4天更换新鲜含药筛选培养基
   
3. 克隆形成：筛选7天后观察细胞克隆形成情况
   
4. 克隆挑取：挑取5-10个抗性克隆转移至35mm培养皿
   
5. 扩大培养：后续可更换为正常培养基培养
   

6.4 工作浓度参考

七、注意事项与安全信息

7.1 关键注意事项

⚠️ 灭菌方法：潮霉素B不能高压灭菌，必须使用0.22 μm滤膜过滤除菌。

⚠️ 细胞状态：筛选时细胞处于活跃分裂状态杀伤效果最好，细胞密度不超过25%。

⚠️ 工作浓度优化：不同细胞系的灵敏度差异显著，首次使用必须做杀灭曲线。

⚠️ 储存稳定性：溶液在2-8°C可稳定保存1年。

7.2 安全操作

八、产品质量标准

湖南汇百益新材料有限公司提供的潮霉素B产品严格执行以下质量标准：

湖南汇百益通过优化发酵与纯化工艺，将产物纯度稳定控制在≥98%，产品无菌、高活性，批次稳定性好，适合科研及工业用户的规模化使用。

包装规格：可按客户需求定制（1g、5g、10g、25g等）

九、供应商介绍：湖南汇百益新材料有限公司

湖南汇百益新材料有限公司成立于2014年，位于湖南省怀化市洪江区工业园8号，拥有50,000平方米生产基地。公司是一家专注于生物基础试剂研发、生产与销售的“国家高新技术企业”、“湖南省专精特新企业”，拥有独立研发试验中心和生产基地，并已通过ISO 9001:2015质量管理体系认证。

公司先后获得“怀化市工程技术研究中心”“湖南师范大学化学生物学功能材料产学研基地”“创新创业大赛湖南省优秀企业”“湖南新材料企业”等一系列荣誉称号。

依托强大的生产平台与技术实力，公司可灵活提供OEM代工服务与个性化定制方案，如提纯、精制加工等，以满足客户多元化需求。旗下品牌“汇百试剂”，通过提供性能稳定可靠、品质媲美进口、成本更具优势的国产试剂，为生物医药、体外诊断、生物工程及科研机构等领域的客户提供基础材料解决方案，以实现关键生物基础试剂国产化替代与关键试剂本土化供应，切实解决中国生物试剂的供应瓶颈问题，并持续助力科研突破与产业创新升级。

公司研发、生产、销售各种高纯生化试剂，包括：

• 糖苷系列：IPTG、ONPG、PNPG、DTT、x-gal、x-gluc等
  
• 生物缓冲剂：Tricine、HEPES、MOPS、CAPS、TAPS、MES、BES等
  
• 表面活性剂与去污剂：SDS、SURFACTIN、EMPIGEN BB、CHAPS、SB-8至SB-18系列等
  
• 检测试剂：泛影酸钠、PCA钙、G-418硫酸盐、DTE、TCEP-HCl、PMSF、PNPP、ABTS、TMB、TMB-PS、鲁米诺、异鲁米诺、ABEI、MU-Gal、D-荧光素钾盐等
  
• 高纯生化试剂：DEPC、异硫氰酸胍、盐酸胍、PMSF、MTT、BSA、WST-8、潮霉素B等
  

湖南汇百益提供的潮霉素B产品具有以下突出优势：

• 高纯度：纯度≥98%，高活性，批次稳定性好
  
• 无菌品质：0.22 μm过滤除菌，可直接用于细胞培养
  
• 现货供应：常备库存，支持快速发货，满足紧急实验需求
  
• 规格灵活：提供多种规格，可按需定制包装
  
• 专业包装：采用密封、防潮包装，2-8°C冷藏运输保存
  
• 技术支持：专业技术团队提供全程使用指导与问题解答
  
• 源头工厂：自产自销，具备价格优势和供应稳定性
  

十、采购与使用建议

在采购潮霉素B（CAS 31282-04-9）时，建议重点关注以下几点：

1. 纯度要求：对于细胞筛选等敏感应用，建议选择纯度≥98%的高品质产品，确保低细胞毒性。
   
2. 无菌要求：潮霉素B不能高压灭菌，须选用已过滤除菌的产品，或自行在无菌条件下过滤。
   
3. 工作浓度优化：首次使用必须通过杀灭曲线确定最佳筛选浓度，不同细胞系差异显著。
   
4. 储存条件：粉末2-8°C冷藏避光保存；配制好的溶液在2-8°C可稳定保存1年。
   
5. 联合筛选：如需构建双抗性细胞株，可与G418、Zeocin等联用，注意各抗生素的筛选浓度需分别优化。
   
6. 细胞状态控制：筛选时细胞密度控制在25%以下，确保细胞处于活跃分裂状态。
   

十一、联系我们

如需获取潮霉素B（CAS 31282-04-9）的产品报价、样品或技术支持，请联系湖南汇百益新材料有限公司：

• 产品咨询：13319523173
  
• 订购邮箱：ivy@hnhbsj.com
  
• 官方网站：https://www.hbsjxcl.com/
  
• 公司地址：湖南省怀化市洪江区工业园8号
  

声明：本产品仅供科研使用，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读产品说明书，并遵守实验室安全操作规范。