嘌呤霉素 (Puromycin) — 快速蛋白合成抑制剂，稳定转染细胞株筛选利器

一、产品基本信息

二、产品简介与核心优势

嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）代谢产生的氨基核苷类抗生素，是目前已知作用机制最独特的蛋白质合成抑制剂之一。作为氨酰-tRNA分子3‘末端的结构类似物，嘌呤霉素能够在翻译过程中掺入延伸中的肽链，导致肽链合成的提前终止，从而迅速杀死缺乏抗性基因的细胞。

嘌呤霉素最大的特点是作用速度极快——通常在2-3天内即可有效清除未转染细胞，而G-418或潮霉素B则需要7-14天。这一特性使其成为急需快速建立稳定细胞株的研究者的首选工具。表达pac基因（puror）的细胞产生嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），通过乙酰化使药物失活，从而获得抗性。

由于pac基因已被广泛克隆至慢病毒、逆转录病毒及多种真核表达载体中，嘌呤霉素已成为慢病毒系统稳定转染/感染细胞株筛选以及CRISPR/Cas9编辑后阳性克隆筛选的首选药物。

核心优势：

• 作用速度最快：筛选周期仅3-5天，显著快于G-418（7-14天）和潮霉素B（7-14天）
  
• 低浓度高效能：哺乳动物细胞工作浓度仅需1-10 μg/mL
  
• 筛选效果稳定：在含血清培养基中稳定，对多种细胞类型均表现出强效杀伤活性
  
• 联合筛选兼容：可与G-418、潮霉素B等联用，构建双抗性细胞株
  
• 多领域应用：涵盖稳定转染筛选、CRISPR筛选、慢病毒系统、蛋白合成机制研究等
  
• 广谱抑制活性：抑制革兰氏阳性菌、真核微生物及哺乳动物细胞
  
• 源头工厂直供：湖南汇百益50000平生产基地，常备库存，支持定制
  

三、作用机制

3.1 蛋白合成抑制原理

嘌呤霉素通过独特的分子模拟机制抑制蛋白质合成：

Step 1：结构模拟

• 嘌呤霉素的分子结构类似氨酰-tRNA的3‘末端
  
• 能够被核糖体A位点识别并结合
  

Step 2：掺入肽链

• 嘌呤霉素作为氨基酸类似物掺入到延伸中的肽链中
  
• 在翻译过程中形成嘌呤霉素-肽链复合物
  

Step 3：链终止

• 与A位点结合后，嘌呤霉素无法参与肽键形成后的转位反应
  
• 导致蛋白质合成的提前终止，释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽
  

作用特点：

• 对革兰氏阳性菌作用最强，对酸杆菌次之
  
• 哺乳动物和昆虫细胞在2 μg/mL以上浓度、48小时内即可被清除99%以上
  

3.2 抗性机制（pac基因）

携带pac基因（通常标记为puror）的细胞表达嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC）：

• PAC通过乙酰化修饰使嘌呤霉素分子失活
  
• 表达pac基因的细胞获得在含嘌呤霉素培养基中生长的能力
  
• pac基因已广泛克隆至慢病毒、逆转录病毒及多种真核/原核表达载体
  

抗性基因来源：Streptomyces alboniger内源pac基因

3.3 药物代谢特点

嘌呤霉素在哺乳动物体内主要通过肝脏代谢，单次给药后血清半衰期极短（仅数分钟），但其活性代谢产物可在体内持续较长时间，使其可作为体内酶抑制剂使用。

重要提示：嘌呤霉素还可作为体外翻译系统的抑制剂，用于研究翻译调控机制、验证特定mRNA的翻译效率等。

四、主要应用领域

4.1 稳定转染哺乳动物细胞筛选（核心应用Ⅰ）

嘌呤霉素是建立稳定转染细胞株最快、最高效的选择性标记之一。将pac抗性基因与目的基因共同构建于同一载体，转染细胞后使用含嘌呤霉素的培养基筛选，仅成功整合外源基因的细胞能够存活。

筛选优势：

• 与G-418相比，筛选周期缩短50%以上（3-5天 vs 7-14天）
  
• 低浓度即可有效筛选（哺乳动物细胞1-10 μg/mL）
  
• 适用于慢病毒、逆转录病毒系统
  

典型筛选流程：

4.2 CRISPR/Cas9基因编辑筛选（核心应用Ⅱ）

在CRISPR/Cas9基因编辑系统中，嘌呤霉素用于筛选成功整合编辑元件的阳性克隆。许多商业化CRISPR载体携带pac基因，以便利用嘌呤霉素进行筛选。

应用场景：

• 基因敲除细胞株构建
  
• 基因敲入筛选
  
• 高通量CRISPR筛选文库
  

4.3 慢病毒/逆转录病毒系统筛选

嘌呤霉素是慢病毒和逆转录病毒稳定转导细胞株筛选的金标准。许多商业化病毒载体携带pac基因，利用嘌呤霉素筛选可快速获得高滴度病毒和稳定表达细胞株。

应用流程：

1. 病毒包装（携带pac基因的病毒载体）
   
2. 病毒转导靶细胞
   
3. 嘌呤霉素筛选（48-72小时）
   
4. 获得稳定表达外源基因的细胞池
   

4.4 蛋白合成机制研究

嘌呤霉素是研究蛋白质合成和翻译调控的重要工具试剂。

应用场景：

• 翻译机制研究：作为体外翻译系统的抑制剂，研究翻译起始、延伸、终止等过程
  
• 翻译效率验证：嘌呤霉素掺入标记法（SUnSET）监测特定mRNA的翻译效率
  
• 核糖体功能分析：研究核糖体在蛋白合成中的作用
  

SUnSET方法原理：嘌呤霉素与新生肽链结合后可通过特异性抗体（抗嘌呤霉素抗体）检测，用于定量分析细胞的整体翻译活性。

4.5 细胞活力与毒性研究

在基础研究中，嘌呤霉素可用于快速诱导蛋白合成抑制以研究特定细胞功能，或用于细胞毒性评估。

4.6 双抗性细胞株构建

嘌呤霉素可与G-418、潮霉素B等联用，筛选同时表达两个独立外源基因的细胞株。

4.7 医学研究应用

在肾脏疾病研究中，嘌呤霉素氨基核苷（PAN）广泛用于构建足细胞损伤模型，研究肾小球疾病的发生机制和药物干预效果。研究证实，嘌呤霉素氨基核苷通过影响足细胞标志蛋白Nephrin和α-SMA的表达及分布，导致足细胞损伤和蛋白尿。

五、杀灭曲线建立（确定最佳筛选浓度）

对于首次使用的细胞系，必须通过杀灭曲线确定最佳筛选浓度，这是确保筛选效果的关键步骤。

5.1 操作流程（96孔板/24孔板）

5.2 哺乳动物细胞浓度梯度参考

5.3 不同细胞类型推荐浓度范围

重要提示：嘌呤霉素在大肠杆菌中的活性较低，使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH调节，且受宿主细胞本身的影响。

六、实验方案

6.1 储存液配制

10 mg/mL嘌呤霉素储存液（推荐浓度）：

配制步骤：

1. 称取适量嘌呤霉素粉末
   
2. 加入无菌水至终体积
   
3. 轻轻混匀至完全溶解
   
4. 0.22 μm滤器过滤除菌（必须）
   
5. 分装于无菌冻存管
   
6. 储存条件：-20°C避光保存，1年内稳定
   

重要提示：

• 嘌呤霉素不能高压灭菌，必须使用过滤除菌
  
• 储存液为无色透明液体
  
• 避免反复冻融，建议分装单次用量保存
  

6.2 稳定转染细胞筛选标准流程

转染后48小时开始筛选：

1. 传代：转染48h后，用含嘌呤霉素的筛选培养基传代细胞
   
2. 维持筛选：每2-3天更换新鲜含药筛选培养基
   
3. 筛选时间：嘌呤霉素筛选至少需要48h，有效浓度的筛选周期一般在3-10天
   
4. 克隆形成：筛选5-7天后观察细胞克隆形成情况
   
5. 克隆挑取：转移5-10个抗性克隆至35mm培养皿
   
6. 稳定培养：后续可降低浓度维持
   

6.3 稳定细胞株维持培养方案

已建立的稳定细胞株可用以下方式之一维持：

6.4 慢病毒转导细胞筛选流程

1. 病毒转导：以MOI=0.5-10转导靶细胞
   
2. 等待表达：转导后48小时（让pac基因充分表达）
   
3. 开始筛选：更换含嘌呤霉素的培养基
   
4. 维持筛选：每2-3天更换新鲜含药培养基
   
5. 获得细胞池：筛选5-7天后获得稳定表达细胞群
   

6.5 工作浓度参考速查表

七、注意事项

7.1 关键注意事项

⚠️ 快速作用特性：

• 嘌呤霉素作用速度极快，通常在2-3天内即可有效清除未转染细胞
  
• 筛选过程中应密切观察细胞状态，避免筛选时间过长导致抗性克隆也被杀死
  

⚠️ 细胞密度控制：

• 细胞处于活跃分裂状态时抗生素效果最明显
  
• 筛选时细胞汇合度最好不超过25%，细胞过密时抗生素效力会明显下降
  
• 必要时可先传代稀释再开始筛选
  

⚠️ 工作浓度优化：

• 不同细胞系的灵敏度差异显著，首次使用必须做杀灭曲线
  
• 哺乳动物细胞常用范围1-10 μg/mL，但具体须根据实验确定
  

⚠️ pH调节（细菌筛选）：

• 筛选大肠杆菌稳转株时，培养基pH必须调节至7.5-8
  
• 嘌呤霉素在大肠杆菌中活性较低，需较高浓度且精确的pH控制
  

7.2 安全信息

毒性警告：嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放，避免皮肤接触。

7.3 常见问题排查

八、嘌呤霉素 vs. 其他筛选抗生素：对比分析

选择建议：

• 快速筛选、慢病毒系统、CRISPR筛选：首选嘌呤霉素，筛选速度最快
  
• 常规稳定转染（不急于时间）：选择G-418，经济实惠
  
• 植物/酵母系统：选择潮霉素B
  
• 双抗性细胞株构建：嘌呤霉素可与G-418或潮霉素B联用
  

九、产品质量标准

湖南汇百益新材料有限公司提供的嘌呤霉素产品严格执行以下质量标准：

湖南汇百益通过优化发酵与纯化工艺，将产物纯度稳定控制在≥98%，产品无菌、高活性，批次稳定性好，适合科研及工业用户的规模化使用。

包装规格：

• 实验室规格：5 mg、10 mg、25 mg、100 mg、500 mg、1 g
  
• 工业规格：5 g、10 g、100 g、1 kg
  
• 溶液形式：10 mg/mL无菌过滤溶液（1 mL、5 mL、10 mL）
  
• 可按客户需求定制包装
  

十、供应商介绍：湖南汇百益新材料有限公司

湖南汇百益新材料有限公司成立于2014年，位于湖南省怀化市洪江区工业园8号，拥有50,000平方米生产基地。公司是一家专注于生物基础试剂研发、生产与销售的“国家高新技术企业”、“湖南省专精特新企业”，拥有独立研发试验中心和生产基地，并已通过ISO 9001:2015质量管理体系认证。

公司先后获得“怀化市工程技术研究中心”“湖南师范大学化学生物学功能材料产学研基地”“创新创业大赛湖南省优秀企业”“湖南新材料企业”等一系列荣誉称号。产品远销东南亚、欧美等多个国家和地区，得到全球客户认可和信赖。

依托强大的生产平台与技术实力，公司可灵活提供OEM代工服务与个性化定制方案，如提纯、精制加工等，以满足客户多元化需求。旗下品牌“汇百试剂”，通过提供性能稳定可靠、品质媲美进口、成本更具优势的国产试剂，为生物医药、体外诊断、生物工程及科研机构等领域的客户提供基础材料解决方案，以实现关键生物基础试剂国产化替代与关键试剂本土化供应，切实解决中国生物试剂的供应瓶颈问题，并持续助力科研突破与产业创新升级。

公司研发、生产、销售各种高纯生化试剂，包括：

• 糖苷系列：IPTG、ONPG、PNPG、DTT、x-gal、x-gluc等
  
• 生物缓冲剂：Tricine、HEPES、MOPS、CAPS、TAPS、MES、BES等
  
• 表面活性剂与去污剂：SDS、SURFACTIN、EMPIGEN BB、CHAPS、SB-8至SB-18系列等
  
• 检测试剂：泛影酸钠、PCA钙、G-418硫酸盐、DTE、TCEP-HCl、PMSF、PNPP、ABTS、TMB、TMB-PS、鲁米诺、异鲁米诺、ABEI、MU-Gal、D-荧光素钾盐等
  
• 高纯生化试剂：DEPC、异硫氰酸胍、盐酸胍、PMSF、MTT、BSA、WST-8、嘌呤霉素、潮霉素B等
  

湖南汇百益提供的嘌呤霉素产品具有以下突出优势：

• 高纯度：纯度≥98%，高活性，批次稳定性好
  
• 快速筛选效果：2-3天内可有效清除未转染细胞
  
• 现货供应：常备库存，支持快速发货，满足紧急实验需求
  
• 规格灵活：提供粉末（5 mg至1 kg）和溶液（10 mg/mL）多种规格
  
• 专业包装：采用密封、防潮包装，2-8°C冷藏运输保存
  
• 技术支持：专业技术团队提供全程使用指导与问题解答
  
• 源头工厂：自产自销，具备价格优势和供应稳定性
  

十一、采购与使用建议

在采购嘌呤霉素（CAS 58-58-2）时，建议重点关注以下几点：

1. 纯度要求：对于细胞筛选等敏感应用，建议选择纯度≥98%的高品质产品，确保筛选效果。
   
2. 溶解方法：
   
3. 工作浓度优化：
   
4. 储存条件：
   
5. 筛选关键要点：
   
6. 安全操作：
   

十二、联系我们

如需获取嘌呤霉素（CAS 58-58-2）的产品报价、样品或技术支持，请联系湖南汇百益新材料有限公司：

• 产品咨询：13319523173
  
• 订购邮箱：ivy@hnhbsj.com
  
• 官方网站：https://www.hbsjxcl.com/
  
• 公司地址：湖南省怀化市洪江区工业园8号
  

声明：本产品仅供科研使用，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读产品说明书，并遵守实验室安全操作规范。嘌呤霉素为有毒化合物，请务必做好个人防护。