蛋白酶 K — 广谱丝氨酸蛋白酶，分子生物学样本处理核心工具

一、产品基本信息

二、产品简介与核心优势

蛋白酶K是一种广谱丝氨酸蛋白酶，属于枯草杆菌蛋白酶相关家族，因能降解角蛋白（keratin）而得名。该酶由真菌 Engyodontium album（原名 Tritirachium album）分泌产生，是分子生物学实验室不可或缺的工具酶。

蛋白酶K的独特之处在于其极高的稳定性和广谱的底物特异性。它能够切割脂肪族、芳香族和疏水性氨基酸残基的羧基端肽键，几乎可以完全水解所有蛋白质。更关键的是，蛋白酶K在变性剂（如SDS、尿素）存在下仍能保持高活性，这一特性使其能够在裂解细胞的同时高效降解组蛋白和核酸酶，从而保护核酸不被降解。

核心优势：

• 变性剂耐受性极强：在1% SDS、4M尿素、3M盐酸胍中仍具高活性，这是其他蛋白酶难以企及的
  
• 广谱底物特异性：可水解多种蛋白质，包括角蛋白等难降解蛋白
  
• 热稳定性优异：最适反应温度65°C，活性是25°C时的12倍
  
• pH适应范围宽：在pH 4.0-12.5范围内稳定，最适pH 6.5-9.5
  
• 金属离子非依赖：EDTA等螯合剂不抑制其活性，反而起稳定作用
  
• 无核酸酶污染：分子生物学级产品不含DNase/RNase
  
• 易于灭活：65°C 10分钟部分失活，80°C 10分钟完全失活
  

三、主要应用领域

3.1 核酸提取与纯化（核心应用）

蛋白酶K是DNA和RNA提取的核心试剂，其作用是在SDS存在下裂解细胞、降解组蛋白和核酸酶，释放并保护核酸。

典型应用：

• 基因组DNA提取（血液、组织、细胞、细菌）
  
• 总RNA提取
  
• 石蜡包埋组织（FFPE）样本核酸提取
  
• 法医学样本DNA提取
  

DNA提取标准流程：

1. 样本与裂解缓冲液混合（含SDS和EDTA）
   
2. 加入50-500 µg/mL蛋白酶K（浓度取决于样本类型）
   
3. 55-65°C孵育1-3小时（或过夜）
   
4. 80°C加热15分钟灭活蛋白酶K
   
5. 后续采用酚-氯仿抽提或离心柱法纯化
   

实验要点：

• 温度越高，蛋白酶K活性越强，65°C时活性比25°C高12倍
  
• 在固定化样本（如石蜡包埋组织）中，蛋白酶K处理时间需延长至过夜
  
• 研究表明，加入蛋白酶K可显著提高RNA和某些情况下的DNA得率
  

3.2 去除核酸酶污染

在RNA提取和分子生物学反应中，去除内源性或外源性核糖核酸酶（RNase）和脱氧核糖核酸酶（DNase） 至关重要。

应用原理：蛋白酶K可降解RNase和DNase，同时其自身在后续步骤中可被热失活或通过酚抽提去除。

应用场景：

• RNA提取过程中保护RNA不被降解
  
• 原位杂交样本预处理
  
• 细胞裂解物中核酸酶失活
  

3.3 菌落PCR快速模板制备

蛋白酶K法可快速制备细菌单菌落PCR模板，无需繁琐的DNA提取步骤。

快速方案（源于赛默飞世尔科技）：

1. 挑取单菌落至12 µL SCL溶液（10 mM Tris-HCl pH 7.5, 1 mM EDTA, 50 µg/mL蛋白酶K）
   
2. 55°C孵育15分钟
   
3. 80°C孵育15分钟灭活蛋白酶K
   
4. 加入20 µL去离子水
   
5. 12,000×g离心3分钟，上清即可作为PCR模板
   

3.4 蛋白样品处理与Western Blot

蛋白酶K可用于蛋白质样品的消化和分析，尤其在蛋白质组学研究中。

应用场景：

• 蛋白质水解与肽图分析
  
• 抗体结合位点鉴定
  
• 生物活性肽的制备
  

研究案例：研究发现，用蛋白酶K消化乳清蛋白（whey protein）后，可产生具有降血压活性的生物活性肽，包括Ile-Pro-Ala、Val-Tyr-Pro等，在自发性高血压大鼠中表现出显著的降压效果。

3.5 脉冲场凝胶电泳（PFGE）样本制备

在进行脉冲场凝胶电泳分析高分子量DNA时，蛋白酶K用于温和裂解细胞，保护大片段DNA不被机械剪切破坏。

3.6 原位杂交与免疫组织化学

在组织切片上进行原位杂交或免疫组化前，蛋白酶K常用于抗原修复和组织通透性增强，以利于探针或抗体进入细胞。

3.7 羽毛角蛋白降解与生物转化

蛋白酶K在生物工程领域也有应用，研究表明通过分子改造获得的蛋白酶K突变体R218S，在羽毛角蛋白降解方面活性提升了15%，热稳定性也显著增强。

四、酶学特性

4.1 酶学参数

4.2 反应条件

4.3 抑制剂与灭活

独特特性：蛋白酶K不被金属螯合剂（EDTA）、巯基试剂或胰蛋白酶抑制剂抑制，这使其非常适合在含EDTA的核酸提取缓冲液中使用。

五、产品质量标准

湖南汇百益新材料有限公司提供的蛋白酶K产品严格执行以下质量标准：

湖南汇百益通过严格的质量控制体系，确保产品无DNase/RNase污染，适合对核酸完整性要求严格的分子生物学应用。

六、实验方案

6.1 储存液配制

20 mg/mL储存液（推荐浓度）：

1. 称取适量蛋白酶K粉末
   
2. 溶解于灭菌去离子水或10 mM Tris-HCl（pH 7.5）
   
3. 轻轻混匀（避免剧烈震荡产生泡沫）
   
4. 分装至无菌EP管（100-200 μL/管）
   
5. 储存条件：-20°C长期保存，2-8°C短期使用（可保存1年）
   

配制要点：

• 避免反复冻融，建议单次用量分装
  
• 高浓度储存液（20 mg/mL）稳定性更好
  
• 溶液型产品可直接使用
  

6.2 工作浓度参考

6.3 灭活方法

6.4 注意事项

• 避免冻融：蛋白酶K对反复冻融敏感，建议分装保存
  
• 工作液现配现用：稀释后的工作液不建议长期保存
  
• 反应体系匹配：蛋白酶K需在含SDS或尿素的缓冲液中发挥最佳活性
  
• 不可高压灭菌：高温高压会彻底失活
  
• 安全操作：蛋白酶K可能引起过敏反应，操作时建议佩戴手套
  

七、供应商介绍：湖南汇百益新材料有限公司

湖南汇百益新材料有限公司成立于2014年，位于怀化市洪江工业园，拥有50,000平方米生产基地。公司是一家专注于生物基础试剂研发、生产与销售的“国家高新技术企业”、“湖南省专精特新企业”，拥有独立研发试验中心和生产基地，并已通过ISO 9001:2015质量管理体系认证。

公司先后获得“怀化市工程技术研究中心”“湖南师范大学化学生物学功能材料产学研基地”“创新创业大赛湖南省优秀企业”“湖南新材料企业”等一系列荣誉称号。

依托强大的生产平台与技术实力，公司可灵活提供OEM代工服务与个性化定制方案，如提纯、精制加工等，以满足客户多元化需求。旗下品牌“汇百试剂”，通过提供性能稳定可靠、品质媲美进口、成本更具优势的国产试剂，为生物医药、体外诊断、生物工程及科研机构等领域的客户提供基础材料解决方案，以实现关键生物基础试剂国产化替代与关键试剂本土化供应，切实解决中国生物试剂的供应瓶颈问题，并持续助力科研突破与产业创新升级。

公司研发、生产、销售各种高纯生化试剂，包括：

• 糖苷系列：IPTG、ONPG、PNPG、DTT、x-gal、x-gluc等
  
• 生物缓冲剂：Tricine、HEPES、MOPS、CAPS、TAPS、MES、BES等
  
• 表面活性剂与去污剂：SDS、SURFACTIN、EMPIGEN BB、CHAPS、SB-8至SB-18系列等
  
• 检测试剂：泛影酸钠、PCA钙、G-418硫酸盐、DTE、TCEP-HCl、PMSF、PNPP、ABTS、TMB、TMB-PS、鲁米诺、异鲁米诺、ABEI、MU-Gal、D-荧光素钾盐等
  
• 高纯生化试剂：DEPC、异硫氰酸胍、PMSF、MTT、BSA、WST-8、蛋白酶K等
  

湖南汇百益提供的蛋白酶K产品具有以下突出优势：

• 高纯度高活性：酶活≥30 U/mg，确保高效裂解蛋白质
  
• 无核酸酶污染：经严格质检，无DNase/RNase残留
  
• 稳定性优异：可在SDS、尿素等变性剂中保持活性
  
• 现货供应：常备库存，支持快速发货，满足紧急实验需求
  
• 规格灵活：提供粉末（100 mg、500 mg、1 g）和溶液（1 mL、5 mL、10 mL）等多种规格
  
• 专业包装：采用密封、防潮包装，冷链运输
  
• 技术支持：专业技术团队提供全程使用指导与问题解答
  
• 源头工厂：自产自销，具备价格优势和供应稳定性
  

八、联系我们

如需获取蛋白酶K（CAS 39450-01-6）的产品报价、样品或技术支持，请联系湖南汇百益新材料有限公司：

• 产品咨询：13319523173
  
• 订购邮箱：ivy@hnhbsj.com
  
• 官方网站：https://www.hbsjxcl.com/
  

声明：本产品仅供科研使用，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读产品说明书，并遵守实验室安全操作规范。