碘化丙啶 — 细胞活力检测与细胞周期分析金标准试剂

一、产品基本信息

二、产品简介与核心优势

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种经典的膜非渗透性红色荧光核酸染料，被公认为细胞活力检测和细胞周期分析的“金标准”试剂。自1975年Krishan首次报道用于流式细胞术以来，PI已成为细胞生物学、免疫学、肿瘤学和药物筛选等领域最常用的核酸染料之一。

PI的核心特性在于无法穿透活细胞的完整细胞膜，但能够自由进入膜完整性受损的凋亡晚期细胞、坏死细胞以及经固定/透化处理的细胞。进入细胞后，PI嵌入双链DNA（或RNA）的碱基对之间，每4-5个碱基对插入一个PI分子，荧光信号增强20-30倍，产生明亮的红色荧光。

PI的两大核心应用：一是用于细胞活力检测——活细胞不被染色，死细胞呈现红色荧光；二是用于细胞周期分析——经RNase处理后，PI与DNA定量结合，荧光强度反映DNA含量，可区分G0/G1、S和G2/M期细胞。

核心优势：

• 经典金标准：40余年应用历史，数十万篇文献引用，实验体系成熟，结果可比性强
  
• 操作简便快速：染色过程仅需5-30分钟，无需复杂步骤
  
• 荧光信号强：DNA结合后荧光增强20-30倍，信噪比优异
  
• 多重染色兼容：红色荧光（~617 nm）与FITC（绿色）、Hoechst（蓝色）等完美区分，适合多参数分析
  
• 仪器兼容性强：可用488 nm蓝光激发（标准流式细胞仪配置），发射光在600-620 nm检测
  
• 经济可靠：相比其他DNA染料，性价比高，结果稳定可靠
  

三、碘化丙啶 vs. 其他核酸染料：对比分析

选择建议：

• 细胞活力/细胞毒性检测：首选PI，经典方法，成本低
  
• 细胞周期分析（固定细胞）：首选PI，最经典、最经济的方法
  
• 需UV激发的实验：选择DAPI（已有UV光源时）
  
• 活细胞核染色：选择Hoechst 33342
  

四、主要应用领域

4.1 细胞活力检测与细胞毒性分析（核心应用Ⅰ）

PI是检测细胞膜完整性的金标准染料，广泛应用于细胞毒性评估、药物筛选和细胞凋亡研究。其原理是：活细胞具有完整的细胞膜，PI被排除在外；当细胞发生凋亡晚期或坏死时，细胞膜完整性丧失，PI进入细胞与DNA结合发出红色荧光。

应用场景：

• 药物细胞毒性评估：检测化合物诱导的细胞死亡，计算IC₅₀值
  
• 细胞凋亡检测：区分凋亡早期（Annexin V+/PI-）和凋亡晚期/坏死（Annexin V+/PI+）
  
• 原代细胞活力评估：解离后快速评估细胞存活率
  
• 质量控制：细胞制品（如CAR-T）的活力放行检测
  

检测平台：

活细胞与死细胞判读：

• 活细胞：无红色荧光（膜完整，PI被排除）
  
• 死细胞/膜损伤细胞：明亮的红色细胞核
  

4.2 细胞周期分析（核心应用Ⅱ）

PI染色是流式细胞术分析细胞周期分布最经典的方法。其原理是：PI以化学计量方式与DNA结合，荧光强度与DNA含量成正比。经RNase处理去除RNA干扰后，G0/G1期细胞（2N DNA）荧光强度最低，S期细胞（2N-4N）中等，G2/M期细胞（4N）约为G1期的2倍。

应用场景：

• 细胞增殖研究（药物、基因操作对细胞周期的影响）
  
• 肿瘤细胞倍性分析
  
• 细胞周期阻滞机制研究
  
• 抗癌药物筛选（评估对DNA合成的影响）
  

标准实验流程（乙醇固定法）：

1. 收集细胞，PBS洗涤
   
2. 70%预冷乙醇固定（-20°C逐滴加入，避免细胞聚集）
   
3. RNase A处理（50-100 μg/mL，37°C，30分钟）——必须步骤，去除RNA干扰
   
4. PI染色（10-50 μg/mL，室温避光15-30分钟）
   
5. 流式细胞仪检测（488 nm激发，610/20 nm接收）
   

结果解读：

关键技术要点：

• RNase处理必不可少：PI同时结合DNA和RNA，未处理会导致S期和G2/M期之间出现假性细胞群
  
• CV值控制：变异系数应<5%-8%，反映数据质量
  
• 单细胞悬液：细胞聚集会干扰分析，需用脉冲宽度/面积排除黏连细胞
  

4.3 多重荧光染色

PI的红色荧光（~617 nm）与FITC/GFP（绿色，~530 nm）、Hoechst（蓝色，~461 nm）等荧光染料光谱分离清晰，适合多参数同时分析。

经典组合方案：

五、实验方案

5.1 储存液配制

1 mg/mL PI储存液（推荐浓度）：

1. 称取10 mg PI粉末
   
2. 加入10 mL去离子水或PBS（需无菌时用0.22 μm滤膜过滤）
   
3. 涡旋或超声助溶
   
4. 分装至无菌EP管（1 mL/管），2-8°C避光保存
   
5. 有效期：6-12个月（避光、冷藏）
   

注意事项：

• PI具潜在毒性，操作时需戴手套
  
• 储存液应避光保存，光照会导致降解
  
• 若出现沉淀，可超声处理或重新配制
  

5.2 细胞活力检测（流式细胞术）

操作流程：

1. 收集细胞（贴壁细胞用胰酶消化），PBS洗涤1次
   
2. 调整细胞密度至1×10⁶ cells/mL
   
3. 加入PI至终浓度1-5 μg/mL
   
4. 避光室温孵育5-15分钟
   
5. 直接上机检测（无需洗涤，洗涤会洗脱死细胞信号）
   
6. 流式细胞仪设置：488 nm激发，585/40 nm或610/20 nm接收
   

注意事项：

• 无需固定：固定会使所有细胞膜透化，全部被染色
  
• 设门对照：
  

5.3 细胞周期分析（流式细胞术）

操作流程：

第一步：细胞固定

1. 收集1×10⁶细胞，PBS洗涤1次
   
2. 逐滴加入1 mL预冷70%乙醇（-20°C），边加边涡旋
   
3. 4°C固定至少30分钟（可保存数周）
   

第二步：RNase处理与PI染色

1. 固定细胞800 rpm离心5分钟，去上清
   
2. PBS洗涤1次
   
3. 加入50 μL RNase A（100 μg/mL），37°C孵育30分钟——关键步骤
   
4. 加入200 μL PI（50 μg/mL）
   
5. 室温避光孵育15-30分钟
   
6. 流式细胞仪检测
   

第三步：数据采集与分析

• 488 nm激发，610/20 nm接收
  
• 使用脉冲面积/脉冲宽度排除黏连细胞
  
• 软件拟合计算各周期比例（如ModFit、FlowJo）
  

5.4 荧光显微镜检测

操作流程：

1. 细胞接种于成像培养板或盖玻片
   
2. 加入PI至终浓度1-5 μg/mL
   
3. 避光室温孵育5-15分钟
   
4. 可直接观察或轻轻洗涤（洗涤会减弱信号）
   
5. 荧光显微镜：TRITC/罗丹明滤光片组（Ex 535 nm/Em 617 nm）
   

活细胞与死细胞判读：

• 活细胞：无红色荧光
  
• 死细胞：明亮的红色细胞核
  

死细胞计数：

• 随机计数多个视野
  
• 死细胞率（%）=（死细胞数/总细胞数）×100%
  

六、产品质量标准

湖南汇百益新材料有限公司提供的碘化丙啶产品严格执行以下质量标准：

湖南汇百益通过优化合成工艺与精制技术，将产物纯度稳定控制在≥99%（HPLC检测），确保染色的特异性强、背景值低。产品每批次均经过流式细胞术验证，确保细胞周期分析与活力检测的性能稳定可靠。

七、供应商介绍：湖南汇百益新材料有限公司

湖南汇百益新材料有限公司成立于2014年，位于怀化市洪江工业园，拥有50,000平方米生产基地。公司是一家专注于生物基础试剂研发、生产与销售的“国家高新技术企业”、“湖南省专精特新企业”，拥有独立研发试验中心和生产基地，并已通过ISO 9001:2015质量管理体系认证。

公司先后获得“怀化市工程技术研究中心”“湖南师范大学化学生物学功能材料产学研基地”“创新创业大赛湖南省优秀企业”“湖南新材料企业”等一系列荣誉称号。

依托强大的生产平台与技术实力，公司可灵活提供OEM代工服务与个性化定制方案，如提纯、精制加工等，以满足客户多元化需求。旗下品牌“汇百试剂”，通过提供性能稳定可靠、品质媲美进口、成本更具优势的国产试剂，为生物医药、体外诊断、生物工程及科研机构等领域的客户提供基础材料解决方案，以实现关键生物基础试剂国产化替代与关键试剂本土化供应，切实解决中国生物试剂的供应瓶颈问题，并持续助力科研突破与产业创新升级。

公司研发、生产、销售各种高纯生化试剂，包括：

• 糖苷系列：IPTG、ONPG、PNPG、DTT、x-gal、x-gluc等
  
• 生物缓冲剂：Tricine、HEPES、MOPS、CAPS、TAPS、MES、BES等
  
• 表面活性剂与去污剂：SDS、SURFACTIN、EMPIGEN BB、CHAPS、SB-8至SB-18系列等
  
• 检测试剂：泛影酸钠、PCA钙、G-418硫酸盐、DTE、TCEP-HCl、PMSF、PNPP、ABTS、TMB、TMB-PS、鲁米诺、异鲁米诺、ABEI、MU-Gal、D-荧光素钾盐等
  
• 高纯生化试剂：DEPC、异硫氰酸胍、PMSF、MTT、BSA、WST-8等
  

湖南汇百益提供的碘化丙啶产品具有以下突出优势：

• 高纯度：HPLC纯度≥99%，批次稳定性好，DNA结合特异性强
  
• 流式验证：每批次经流式细胞术验证，确保细胞周期分析性能
  
• 现货供应：常备库存，支持快速发货，满足紧急实验需求
  
• 规格灵活：提供多种规格（10 mg、25 mg、50 mg、100 mg、500 mg、1 g等）
  
• 专业包装：采用避光、密封、防潮包装，2-8°C冷藏运输保存
  
• 技术支持：专业技术团队提供全程使用指导与问题解答
  
• 源头工厂：自产自销，具备价格优势和供应稳定性
  

八、采购与使用建议

在采购碘化丙啶（CAS 25535-16-4）时，建议重点关注以下几点：

1. 纯度要求：对于流式细胞术细胞周期分析等敏感应用，建议选择纯度≥99%的产品，确保低背景和高特异性。
   
2. RNase处理必要性：细胞周期分析时必须进行RNase处理，以去除RNA干扰，否则会产生假性S期细胞群。
   
3. 溶解方法：
   
4. 储存条件：2-8°C冷藏保存，避光防潮。储存液在2-8°C避光可稳定保存6-12个月。
   
5. 安全操作：PI具潜在毒性，操作时需戴手套和护目镜，避免直接接触。
   
6. 工作浓度参考：
   
7. 避光操作：PI对光敏感，储存和工作液均应避光（可用铝箔包裹）。
   
8. 对照设置：
   

九、联系我们

如需获取碘化丙啶（CAS 25535-16-4）的产品报价、样品或技术支持，请联系湖南汇百益新材料有限公司：

• 产品咨询：13319523173
  
• 订购邮箱：ivy@hnhbsj.com
  
• 官方网站：https://www.hbsjxcl.com/
  

声明：本产品仅供科研使用，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读产品说明书，并遵守实验室安全操作规范。