如何利用IPTG从细菌中提取蛋白质？湖南汇百益方案分享！

快速诱导（并非对所有人都有效，可能会产生次优产量）：

从相对新鲜的平板（<4 周）中挑取一个菌落，并在 15 mL 卡口管中于 1-2 mL LB+AMP（或其他选择）中于 30°C（或 37°C）下培养过夜。旋转器或振动器。

在 2 mL LB+AMP 中按 1:50（如果 37°CO/N 则为 1:100）稀释，并在旋转器中的 15 mL 卡口管中于 37°C 下生长 3-4 小时。

在 15 mL 锥形瓶中制备 1 mL LB+AMP+1mM IPTG，并在使用前约 10 分钟预热至 37°C。

3-4 小时后，在 37°C 下从管中取出 1 mL 并放入贴有标签的 1.5 mL 管中。室温下最大旋转 30 秒，然后取出 Super。将颗粒冷冻在 -20°C 直至需要。这是非感应控制。

将预热的 1 mL LB+AMP+1 mM IPTG 添加到 15 mL 卡口管中，并返回到 37°C 3-4 小时。这将使最终体积恢复到 2 mL，IPTG 的最终浓度恢复到 0.5 mM。

3-4 小时后，从诱导样品中转移 1 mL 至标记的 1.5 mL 管中，并在室温下最大旋转 30 秒，然后取出 Super。将颗粒冷冻在 -20°C 直至需要。这是诱导样本。

SDS-PAGE 样品制备：向未诱导和诱导样品中添加 100 uL 1X 上样缓冲液（参见下面的解决方案）和 1% BME。涡旋 10 秒至 1 分钟或直至没有细菌团块。煮沸 3-5 分钟，最大旋转 30 秒。

慢速诱导（可以增强蛋白质的溶解度）：

将 20°C 1 mL LB+AMP+1mM IPTG 添加至 15 mL 卡口管中，并在 20°C 下旋转或摇动孵育 12-16 小时。这将使最终体积恢复到 2 mL，IPTG 的最终浓度恢复到 0.5 mM。

12-16 小时后，从诱导样品中转移 1 mL 至标记的 1.5 mL 管中，并在室温下最大旋转 30 秒，然后取出 Super。将颗粒冷冻在 -20°C 直至需要。这是诱导样本。

注意：如果样品煮沸时间过长，样品会因细胞 DNA 全部释放而变得粘稠。如果您能找到低粘度区域，您仍然可以使用该样品；然而，通常最好重复这个实验。

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