什么是IPTG？

IPTG正式名称为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，是一种生化试剂，用作异乳糖的分子模拟物，异乳糖是一种乳糖代谢物，可触发 lac 操纵子的转录。

感应需要什么？

通常将 IPTG 的无菌 1 M 溶液按 1:1000 稀释添加到对数生长的细菌培养物中进行诱导。可以使用不同的 IPTG 最终浓度。可以使用快速方法进行诱导，这会给您带来次优的产量，也可以使用慢速方法来产生更多可溶性蛋白质。

快速感应步骤

· 从新鲜平板中挑选一个菌落，并在 1-2 mL LB + AMP 中于 30°C 过夜培养。

· 在 2 mL LB +AMP 中按 1:50 稀释，并在 37°C 下生长 3-4 小时。

· 在 15 mL 锥形中准备 1 mL 的 LB +AMP 和 1 mM IPTG。使用前预热 10 分钟，温度为 37°C。

· 3-4 小时后，从管中取出 1 mL 并放入贴有标签的 1.5 mL 管中。

· 最大旋转 30 秒，室温，然后除去超级。

· 将颗粒冷冻在 -20°C 直至需要。

缓慢的诱导步骤

对于蛋白质的缓慢诱导，请遵循快速诱导方案并进行以下更改：

· 将 20°C 1 mL LB+AMP+1 mM IPTG 添加到 15 ml 卡口管中，并在 20°C 下旋转或振荡孵育 12-16 小时。

· 12-16 小时后，从诱导样品中转移 1 mL 至标记的 1.5ml 管中

· 室温下最大旋转 30 秒，并除去超级

· 将颗粒冷冻在 -20°C 直至需要。

IPTG 绑定在哪里？

IPTG 将与 lac 阻遏物结合并从 lac 操纵子中释放四聚体阻遏物。这将使 lac 操纵子中的转录基因催化 β-半乳糖苷酶水解成单糖。

优点

由于它不能被大肠杆菌代谢，因此可用于体内研究。IPTG 的浓度保持恒定，并且 lac p/o 控制基因的表达率也保持恒定。IPTG 在低浓度下可以通过乳糖渗透酶进入，但在高浓度下，细胞将独立进入。

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