2‘,7’-二氯荧光素 (DCF) — 活性氧（ROS）检测荧光参比探针，氧化应激研究质控标准品

一、产品基本信息

二、产品简介与核心优势

2‘,7’-二氯荧光素（Dichlorofluorescein, DCF） 是经典活性氧（ROS）检测体系中DCFH-DA探针的最终荧光氧化产物。在生物学研究中，DCFH-DA本身不具有荧光，进入细胞后被酯酶水解为无荧光的DCFH（2‘,7’-二氯二氢荧光素），DCFH被细胞内活性氧氧化后生成高荧光的DCF，因此DCF的荧光强度直接反映细胞内活性氧的水平。

DCF是这一检测体系的终产物标准品，在实验设计中具有多重重要用途：可作为ROS检测试剂盒的阳性对照、荧光显微镜成像的定位参比探针、以及DCFH-DA氧化效率的质控标准品。相比于前体探针DCFH-DA，DCF本身具有稳定的荧光特性，无需经过细胞内的酯酶水解和ROS氧化两步激活，可直接用于荧光成像和定量分析。

核心优势：

• 稳定的荧光标准品：DCF是DCFH-DA/ROS检测体系的终产物，荧光性质稳定，可直接作为阳性对照和参比探针使用
  
• 经典荧光特性：激发波长约502 nm，发射波长约530 nm，与FITC通道完美匹配，兼容绝大多数荧光检测平台
  
• 多平台兼容：适用于荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等多种检测仪器
  
• 位置定位探针：研究表明DCF位于脂质双分子层内部，可用于研究探针在细胞/脂质体中的分布位置
  
• 质控必需试剂：在建立稳定的ROS检测方法时，DCF可作为光照射自氧化检测体系的关键起始试剂
  

三、作用机制与在ROS检测中的定位

3.1 DCF在经典ROS检测体系中的位置

经典的DCFH-DA活性氧检测体系包含三步转化过程：

DCF的生成反应：
DCFH（无荧光）+ 活性氧（ROS）→ DCF（绿色荧光） + H₂O

3.2 DCF的核心用途

DCF作为这一检测体系的终产物标准品，在实验设计和质控中具有以下不可或缺的用途：

用途一：阳性对照品

• 直接替代活细胞氧化过程，作为荧光检测系统的阳性对照
  
• 用于验证仪器参数设置（激发/发射波长、增益值等）
  
• 用于评估不同批次试剂盒的检测灵敏度
  

用途二：荧光参比探针

• 在建立新的ROS检测方法时作为荧光强度参考标准
  
• 用于光照射自氧化检测体系的起始荧光信号校准
  
• 用于比较不同实验条件下的相对荧光强度
  

用途三：定位研究探针

• 研究表明DCF位于脂质双分子层内部
  
• 可用于研究探针在细胞膜、脂质体、人工膜中的分布位置
  
• 验证新型探针设计的膜穿透性和定位特性
  

用途四：质控标准品

• 验证DCFH-DA探针的氧化效率
  
• 检测试剂体系的背景荧光水平
  
• 进行批次间一致性验证
  

四、主要应用领域

4.1 活性氧检测试剂盒的阳性对照（核心应用）

DCF是ROS检测试剂盒的重要组成组分。在商品化ROS检测试剂盒中，DCFH-DA探针与DCF标准品常常同时提供，其中DCF作为阳性对照用于验证检测体系的可靠性。

实验应用：

• 仪器参数校准：用已知浓度的DCF溶液校准荧光酶标仪/流式细胞仪的检测灵敏度和线性范围
  
• 阳性对照实验：在细胞实验中，用DCF标准品直接替代DCFH-DA氧化过程，验证荧光检测系统工作正常
  
• 定量标准曲线：建立DCF浓度-荧光强度标准曲线，用于半定量分析细胞内ROS水平
  

4.2 ROS检测方法的建立与验证

在开发新的ROS检测方法或优化现有方法时，DCF作为荧光参比探针具有关键价值。

方法学应用：

• 光照射自氧化检测法：研究表明，在光照条件下，DCF的存在可催化DCFH-DA的自氧化过程，建立更灵敏稳定的ROS检测方法
  
• 方法验证：用DCF标准品验证新方法的线性范围、检测限和重复性
  
• 交叉验证：在不同仪器平台（荧光显微镜 vs 流式细胞仪）间用DCF标准品进行结果比对
  

4.3 荧光探针的膜定位研究

DCF及其前体DCFH-DA在细胞膜/脂质双分子层中的精确定位研究已有重要进展。

研究方向：

• 脂质体模型研究：利用NMR技术确定DCF、DCFH和DCFH-DA在脂质双分子层中的精确位置
  
• 膜通透性研究：比较不同化学形式（DCFH-DA、DCFH、DCF）的膜穿透能力和分布特性
  
• 新型探针设计验证：以DCF为参比，验证新型ROS探针的膜定位和氧化敏感性
  

4.4 流式细胞术与高内涵筛选

DCF的荧光特性使其完美适配高通量流式细胞术和成像筛选平台。

检测参数：

• 激发波长：488 nm（argon离子激光器）
  
• 发射波长：525-530 nm（FITC通道）
  
• 荧光强度：与DCF浓度成正比
  

应用场景：

• 流式细胞仪的通道校准和质控
  
• 高内涵成像系统的荧光强度标准化
  
• 大规模化合物库的抗氧化活性筛选的阳性对照
  

4.5 植物生物学研究

在植物ROS检测中，DCFH-DA/ DCF体系已被成功应用。

应用示例：

• 荔枝果实脱落区（FAZ）的ROS水平检测
  
• 植物组织切片用50 μM DCFH-DA孵育1小时后，用激光共聚焦显微镜观察DCF荧光
  
• DCF标准品可作为植物组织切片染色的阳性对照
  

五、DCF vs. DCFH-DA：对比分析

湖南汇百益提供完整的DCF/DCFH-DA产品线，您可根据实验需求选择：

选择建议：

• 作为阳性对照或荧光标准品：选择DCF（本品），荧光稳定，直接使用
  
• 用于活细胞内ROS检测：选择DCFH-DA，可穿透细胞膜，对ROS敏感
  
• 建立定量标准曲线：选择DCF（本品），已知浓度-荧光关系
  
• 验证ROS检测试剂盒性能：两者都需要，DCF作为阳性对照验证检测体系，DCFH-DA作为探针检测细胞样本
  

六、产品质量标准

湖南汇百益新材料有限公司提供的DCF产品严格执行以下质量标准：

湖南汇百益通过优化合成工艺与精制技术，将产物纯度稳定控制在≥98%（HPLC检测），确保荧光性能的一致性和可靠性。产品批间稳定性良好，适合科研及诊断试剂盒的规模化生产。

储存稳定性：

• 粉末在-20°C避光干燥条件下可稳定保存2年以上
  
• DMSO溶液在-20°C避光可保存6个月
  
• 产品对光敏感，储存和工作液均应严格避光
  

七、实验方案

7.1 DCF储存液配制

10 mM DMSO储存液（推荐用于阳性对照）：

• 称取4.01 mg DCF粉末，加入1 mL DMSO
  
• 涡旋混匀至完全溶解
  
• 分装至无菌EP管（10-20 μL/管），避免反复冻融
  
• -20°C避光保存
  

1 mM工作液配制（用于荧光标准曲线）：

• 取10 mM储存液100 μL，加入900 μL PBS或去离子水
  
• 混匀后即可使用
  
• 4°C避光短期保存（1-2周）
  

7.2 荧光标准曲线建立

96孔板操作流程：

检测：

• 荧光酶标仪：激发502 nm，发射530 nm
  
• 记录各孔的荧光强度（RFU）
  
• 绘制浓度-荧光强度标准曲线
  

7.3 作为ROS检测试剂盒阳性对照

实验流程：

1. 将已知浓度的DCF溶液（如10 μM）加入微孔板中
   
2. 用荧光酶标仪检测荧光强度（Ex/Em=502/530 nm）
   
3. 验证检测体系的灵敏度：荧光强度应显著高于空白对照
   
4. 比较不同批次试剂盒的检测性能
   

7.4 仪器校准（流式细胞仪）

校准流程：

1. 制备DCF荧光微球或DCF溶液样品
   
2. 设置流式细胞仪参数：488 nm激发，530 nm（FITC通道）检测
   
3. 调整PMT电压使DCF阳性信号位于合适通道（如10²-10³）
   
4. 验证阴性对照（未染色细胞/PBS）位于通道10¹以下
   
5. 保存仪器设置用于后续实验
   

八、注意事项

避光操作：

• DCF对光敏感，暴露于光线可能降解并改变荧光强度
  
• 储存和工作液均应用铝箔包裹避光保存
  
• 实验操作应在弱光环境下进行
  

pH影响：

• DCF的荧光强度受pH影响，pH高于7.4时荧光信号增强
  
• 建议在标准缓冲体系（如PBS，pH 7.4）中建立标准曲线
  
• 保持实验条件的一致性以确保结果可比性
  

溶剂选择：

• DCF微溶于水，推荐使用DMSO配制储存液
  
• 工作液可用PBS或去离子水稀释
  
• DMSO终浓度应控制在≤1%，以避免对细胞实验的影响
  

质量控制：

• 新批次DCF建议与旧批次进行荧光强度比较
  
• 建立浓度-荧光标准曲线验证线性关系
  
• 储存液变色（变为深色）表明可能降解，应更换
  

九、供应商介绍：湖南汇百益新材料有限公司

湖南汇百益新材料有限公司成立于2014年，位于怀化市洪江工业园，拥有50,000平方米生产基地。公司是一家专注于生物基础试剂研发、生产与销售的“国家高新技术企业”、“湖南省专精特新企业”，拥有独立研发试验中心和生产基地，并已通过ISO 9001:2015质量管理体系认证。公司严格按照国际标准，不断完善硬件设施与质控流程，构建了全方位覆盖的精控生产体系，核心产品IPTG、DTT等高端生物原材料，质量已达国际先进水平。

公司先后获得“怀化市工程技术研究中心”“湖南师范大学化学生物学功能材料产学研基地”“创新创业大赛湖南省优秀企业”“湖南新材料企业”等一系列荣誉称号。

依托强大的生产平台与技术实力，公司可灵活提供OEM代工服务与个性化定制方案，如提纯、精制加工等，以满足客户多元化需求。旗下品牌“汇百试剂”，通过提供性能稳定可靠、品质媲美进口、成本更具优势的国产试剂，为生物医药、体外诊断、生物工程及科研机构等领域的客户提供基础材料解决方案，以实现关键生物基础试剂国产化替代与关键试剂本土化供应，切实解决中国生物试剂的供应瓶颈问题，并持续助力科研突破与产业创新升级。

通过多年的努力，公司已建成完善的营销网络，辐射海内外市场，产品远销至东南亚、欧美等多个国家和地区，得到全球客户的认可和信赖。

公司研发、生产、销售各种高纯生化试剂，包括：

• 糖苷系列：IPTG、ONPG、PNPG、DTT、x-gal、x-gluc、D-荧光素钾盐等
  
• 生物缓冲剂：Tricine、HEPES、MOPS、CAPS、TAPS、MES、BES等
  
• 检测试剂：ABTS、TMB、TMB-PS、鲁米诺、异鲁米诺、WST-8、PMS、DCFH-DA、DCF等
  
• 高纯生化试剂：DEPC、异硫氰酸胍、PMSF、BSA等
  

湖南汇百益提供的DCF产品具有以下突出优势：

• 高纯度：HPLC纯度≥98%，荧光性能稳定可靠
  
• 荧光标准品：可作为ROS检测体系的高质量阳性对照
  
• 批间一致性：严格控制生产工艺，确保不同批次荧光强度一致性
  
• 现货供应：常备库存，支持快速发货，满足紧急实验需求
  
• 规格灵活：提供从毫克级到克级（10 mg、25 mg、50 mg、100 mg、500 mg等）的产品
  
• 专业包装：采用避光、密封、防潮包装，-20°C冷冻运输保存
  
• 技术支持：专业技术团队提供全程使用指导与问题解答
  
• 源头工厂：自产自销，具备价格优势和供应稳定性
  

十、采购与使用建议

在采购DCF（CAS 76-54-0）时，建议重点关注以下几点：

1. 纯度要求：作为荧光参比探针，建议选择纯度≥98%的产品，以确保荧光性能的一致性。
   
2. CAS号确认：DCF的正确CAS号为76-54-0，请注意与DCFH-DA（2044-85-1）区分。
   
3. 溶解性验证：产品应在DMSO中完全溶解，溶液应澄清透明。
   
4. 荧光性能验证：新批次首次使用时，建议检测502 nm激发/530 nm发射条件下的荧光强度，与以往批次比较确认性能一致。
   
5. 储存条件：-20°C冷冻保存，避光防潮。粉末在-20°C可稳定保存2年。
   
6. 分装建议：DMSO储存液建议按单次用量分装（10-20 μL/管），-20°C避光保存，避免反复冻融。
   
7. 批间一致性：对于标准化实验流程和试剂盒生产，选择具备严格质量控制体系的供应商。
   

十一、联系我们

如需获取DCF（CAS 76-54-0）的产品报价、样品或技术支持，请联系湖南汇百益新材料有限公司：

• 产品咨询：13319523173
  
• 订购邮箱：ivy@hnhbsj.com
  
• 官方网站：https://www.hbsjxcl.com/
  

声明：本产品仅供科研使用，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读产品说明书，并遵守实验室安全操作规范。