噻唑蓝 (MTT) — 细胞活力检测经典比色试剂，细胞增殖与药物筛选核心工具

一、产品基本信息

二、产品简介与核心优势

MTT（噻唑蓝）是细胞生物学领域最经典、应用最广泛的细胞活力检测试剂，由T. Mosmann于1983年首次报道并应用于细胞增殖和细胞毒性检测 。MTT是一种黄色四氮唑盐，其检测原理基于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将外源性MTT还原为不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan） 并沉积在细胞中，而死细胞无此功能 。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在570 nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比 。

MTT法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等 。它的特点是灵敏度高、经济实惠，至今仍是许多实验室细胞活力检测的首选方法 。

核心优势：

• 经典方法、文献海量：自1983年建立以来，已有数万篇SCI论文引用，实验方法成熟，结果可比性强
  
• 经济实惠：与CCK-8、XTT等新型试剂相比，MTT成本更低，适合大规模、重复性实验 
  
• 灵敏度高：可检测低至几百个细胞的活性变化，线性范围宽
  
• 操作简便：基本流程为加药→加MTT→孵育→溶解→测OD，无需特殊设备 
  
• 结果稳定：甲臜产物在DMSO中稳定，溶解后1小时内读数均可靠 
  
• 可测定绝对细胞数：通过标准曲线可将OD值换算为细胞数量
  

三、检测原理

MTT的显色反应基于活细胞线粒体脱氢酶的还原反应 ：

Step 1：细胞摄取与还原

• MTT（黄色）进入活细胞
  
• 线粒体中的琥珀酸脱氢酶将MTT作为电子受体
  
• 在NADH存在下，MTT的四唑环被还原断裂
  

Step 2：甲臜形成

• 生成不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）
  
• 甲臜结晶沉积在细胞质中，死细胞无法发生此反应 
  

Step 3：溶解与定量

• 加入DMSO（二甲基亚砜）或酸化异丙醇溶解甲臜结晶 
  
• 使用酶标仪在570 nm（参比波长630 nm）处测定吸光度 
  
• 吸光度强度与活细胞数量成正比
  

反应特点：

• 反应特异性强，仅限于活细胞中的功能性线粒体
  
• 甲臜结晶不溶于水，需有机溶剂溶解
  
• 反应受线粒体功能状态影响，可间接反映细胞代谢活性
  
• 570 nm检测，参比波长630 nm用于背景校正 
  

四、MTT vs. 其他细胞活力检测方法：对比分析

选择建议 ：

• 常规贴壁细胞实验、预算有限：首选MTT，经济实惠，数据可比性强
  
• 悬浮细胞实验、高通量筛选：选择CCK-8或XTT，操作更便捷
  
• 需要连续监测同一孔细胞：选择CCK-8（细胞毒性极低）
  
• 初学者或首次进行细胞活力检测：MTT方法经典、文献支持多，易于上手
  

五、主要应用领域

5.1 细胞增殖检测（核心应用）

MTT是细胞生长曲线绘制和增殖能力评估的经典方法 。

应用场景：

• 基因过表达/敲低对细胞增殖的影响评估
  
• 生长因子、细胞因子对细胞增殖的促进作用检测
  
• 不同培养条件对细胞生长的影响比较
  
• 细胞代次活力监测
  

方法优势：可通过连续多天检测绘制完整生长曲线 

5.2 药物细胞毒性筛选（核心应用）

MTT法是抗肿瘤药物筛选和药物安全性评价的首选方法之一 。

应用场景：

• 化疗药物对肿瘤细胞的杀伤效果评估
  
• 化合物库的高通量毒性筛选
  
• 纳米材料、医疗器械的细胞相容性评价
  
• 中药提取物的抗肿瘤活性筛选
  

数据分析：

• 计算半数抑制浓度（IC₅₀）
  
• 评估细胞存活率 = 实验组OD/对照组OD × 100%
  
• 计算细胞抑制率 = (1 - 实验组OD/对照组OD) × 100% 
  

5.3 抗结核药物筛选

研究证实，MTT法可作为抗结核药物体外筛选的快速、经济检测方法 。

优势：与传统菌落计数法相比，MTT法结果获取更快（4-6小时 vs. 数天至数周）

5.4 肿瘤放射敏感性测定

MTT法可用于评估肿瘤细胞对放射治疗的敏感性，指导临床放疗方案制定 。

5.5 脱氢酶活性检测

MTT可作为电子受体用于研究NAD(P)依赖性脱氢酶的活性 。

5.6 生物活性因子活性检测

MTT法可用于生长因子、细胞因子等生物活性物质的生物学活性定量 。

六、实验方案

6.1 MTT溶液配制

配制方法 ：

1. 称取MTT粉末，用磷酸缓冲液（PBS，pH 7.4） 配制成5 mg/mL的溶液
   
2. 60°C水浴助溶（避免高温长时间加热）
   
3. 用0.22 μm滤膜过滤除菌
   
4. 分装至无菌离心管中，用铝箔纸包裹避光
   
5. 储存条件：-20°C长期保存（可稳定保存6个月以上），4°C短期保存（约2周）
   

注意事项：

• MTT溶液变为灰绿色或棕色时不可使用 
  
• 避免反复冻融，建议按单次用量分装
  
• MTT有一定致癌性，操作时需戴手套 
  

6.2 MTT溶剂准备

DMSO溶解法（最常用）：

• 直接使用细胞培养级DMSO
  
• 每孔加入100-150 μL DMSO 
  

酸化异丙醇法：

• 4 mM HCl，含0.1% NP40的异丙醇溶液 
  

6.3 贴壁细胞MTT检测流程 

第一步：细胞接种

• 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度
  
• 96孔板每孔加入100 μL细胞悬液（建议密度：1000-10000个细胞/孔）
  
• 边缘孔用无菌PBS填充，防止边缘效应 
  

第二步：药物处理

• 37°C，5% CO₂培养至细胞贴壁（通常过夜）
  
• 加入梯度浓度的待测药物，每孔100 μL
  
• 设3-5个复孔，同时设空白对照（不加细胞，加培养基）和阴性对照（细胞不加药）
  

第三步：MTT孵育

• 培养16-48小时后，每孔加入10-20 μL MTT溶液（5 mg/mL）
  
• 37°C避光孵育4小时
  

第四步：甲臜溶解

• 小心吸弃孔内培养上清液（注意不要吸走甲臜结晶）
  
• 每孔加入100-150 μL DMSO
  
• 置摇床上低速振荡10-15分钟，使结晶完全溶解 
  

第五步：检测

• 使用酶标仪在570 nm（参比波长630 nm）处测定吸光度 
  
• 1小时内完成读板
  

第六步：数据分析

• 细胞存活率（%）=（实验孔OD - 空白孔OD）/（对照孔OD - 空白孔OD）× 100%
  

6.4 悬浮细胞MTT检测流程 

1. 接种细胞后，药物处理相应时间
   
2. 每孔加入10 μL MTT溶液（5 mg/mL），继续培养4小时
   
3. 离心96孔板（1000-2000 rpm，5-10分钟）
   
4. 小心吸弃上清（注意不要吸走沉淀的甲臜结晶）
   
5. 每孔加入100-150 μL DMSO溶解
   
6. 振荡10-15分钟后于570 nm测OD
   

6.5 注意事项 

细胞密度优化：

• 预实验确定最适接种密度（保证对照孔OD值在0.6-1.2之间）
  
• 线性范围：OD值应在0-0.7范围内 
  

血清干扰：

• 含血清的培养基可能产生背景，使用无血清培养基可降低背景 
  
• 酚红会产生背景干扰，建议使用无酚红培养基或设置背景对照 
  

药物与MTT反应：

• 某些还原性药物（如谷胱甘肽、维生素C）可直接还原MTT
  
• 加MTT前用PBS洗涤细胞可避免干扰 
  

悬浮细胞处理：

• 推荐使用圆底96孔板
  
• 必须离心去除上清后再加DMSO
  
• 悬浮细胞推荐使用WST-1或CCK-8 
  

安全操作：

• MTT有致癌性，操作时戴手套 
  
• DMSO有毒，在通风橱中使用
  

七、产品质量标准

湖南汇百益新材料有限公司提供的MTT产品严格执行以下质量标准：

湖南汇百益通过优化合成工艺与精制技术，确保产品纯度符合高标准要求，批间稳定性良好，适合细胞实验室及试剂盒生产企业的规模化使用。

储存稳定性 ：

• 粉末在2-8°C冷藏、避光防潮条件下可稳定保存2年
  
• MTT溶液（5 mg/mL）在-20°C避光可稳定保存6个月，4°C仅可保存2周
  
• MTT对光敏感，储存和工作液均应避光
  

八、供应商介绍：湖南汇百益新材料有限公司

湖南汇百益新材料有限公司成立于2014年，位于怀化市洪江工业园，拥有50,000平方米生产基地。公司是一家专注于生物基础试剂研发、生产与销售的“国家高新技术企业”、“湖南省专精特新企业”，拥有独立研发试验中心和生产基地，并已通过ISO 9001:2015质量管理体系认证。公司严格按照国际标准，不断完善硬件设施与质控流程，构建了全方位覆盖的精控生产体系，核心产品IPTG、DTT等高端生物原材料，质量已达国际先进水平 。

公司先后获得“怀化市工程技术研究中心”“湖南师范大学化学生物学功能材料产学研基地”“创新创业大赛湖南省优秀企业”“湖南新材料企业”等一系列荣誉称号。

依托强大的生产平台与技术实力，公司可灵活提供OEM代工服务与个性化定制方案，如提纯、精制加工等，以满足客户多元化需求。旗下品牌“汇百试剂”，通过提供性能稳定可靠、品质媲美进口、成本更具优势的国产试剂，为生物医药、体外诊断、生物工程及科研机构等领域的客户提供基础材料解决方案，以实现关键生物基础试剂国产化替代与关键试剂本土化供应，切实解决中国生物试剂的供应瓶颈问题，并持续助力科研突破与产业创新升级 。

公司研发、生产、销售各种高纯生化试剂，包括：

• 糖苷系列：IPTG、ONPG、PNPG、DTT、x-gal、x-gluc、D-荧光素钾盐等
  
• 生物缓冲剂：Tricine、HEPES、MOPS、CAPS、TAPS、MES、BES等
  
• 检测试剂：ABTS、TMB、TMB-PS、鲁米诺、异鲁米诺、WST-8、PMS、MTT等
  
• 高纯生化试剂：DEPC、异硫氰酸胍、PMSF、BSA等
  

湖南汇百益提供的MTT产品具有以下突出优势：

• 高纯度：纯度≥98%，批次稳定性好，细胞毒性检测性能优异
  
• 灵敏度高：经灵敏度试验验证，可检测低至35 ppm葡萄糖的还原反应 
  
• 现货供应：常备库存，支持快速发货，满足紧急实验需求
  
• 规格灵活：提供从毫克级到公斤级（100 mg、500 mg、1 g、5 g、25 g、100 g等）的产品
  
• 专业包装：采用避光、密封、防潮包装，惰性气体保护，2-8°C冷藏运输保存
  
• 技术支持：专业技术团队提供全程使用指导与问题解答
  
• 源头工厂：自产自销，具备价格优势和供应稳定性
  

九、采购与使用建议

在采购MTT（CAS 298-93-1）时，建议重点关注以下几点：

1. 纯度要求：对于细胞活力检测等敏感实验，建议选择纯度≥98%的产品，以确保检测的准确性和重复性。
   
2. 灵敏度验证：优质的MTT应通过灵敏度试验，与35 ppm葡萄糖反应应显红紫色 。
   
3. 溶解性验证：MTT应溶于DMSO（50 mg/mL）和热水（5 mg/mL溶于PBS），微溶于甲醇，不溶于乙醇 。
   
4. 颜色观察：正常MTT粉末为黄色，溶液为黄色；如变为灰绿色或棕色表明已降解，不可使用 。
   
5. 储存条件：2-8°C冷藏保存，避光防潮，建议在惰性气体保护下保存。粉末在2-8°C可稳定保存2年。
   
6. 溶液配制注意事项：
   
7. 批间一致性：对于标准化实验流程，选择具备严格质量控制体系的供应商。
   
8. 使用剂量参考：
   

十、联系我们

如需获取MTT（CAS 298-93-1）的产品报价、样品或技术支持，请联系湖南汇百益新材料有限公司：

• 产品咨询：13319523173
  
• 订购邮箱：ivy@hnhbsj.com
  
• 官方网站：https://www.hbsjxcl.com/
  
• 公司地址：湖南省怀化市洪江区工业园8号 
  

声明：本产品仅供科研使用，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读产品说明书，并遵守实验室安全操作规范。