3,3‘,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐（TMB-HCl）— 高水溶性HRP显色底物，ELISA与IHC的理想选择

一、产品基本信息

• 产品名称：3,3‘,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐
  
• 英文名称：3,3‘,5,5’-Tetramethylbenzidine dihydrochloride
  
• CAS号：64285-73-0
  
• 分子式：C₁₆H₂₂Cl₂N₂
  
• 分子量：313.27
  
• 外观：白色至淡黄色结晶粉末
  
• 纯度：≥99%（HPLC）
  
• 熔点：≥300°C
  
• 溶解性：易溶于水，也可溶于醋酸:水(1:2)混合溶剂
  
• 储存条件：2-8°C冷藏，避光防潮密闭干燥，远离金属
  
• EINECS号：264-769-6
  
• MDL号：MFCD00012961
  

二、产品简介与核心优势

TMB-HCl（TMB二盐酸盐）是TMB的水溶性盐形式，也是辣根过氧化物酶（HRP）的敏感显色底物。与游离碱TMB（难溶于水）不同，TMB-HCl具有优异的水溶性，可直接在水相体系中配制使用，无需借助DMSO、丙酮等有机溶剂助溶，极大简化了实验操作流程。

在HRP和过氧化氢存在下，TMB-HCl被氧化生成可溶性的蓝绿色产物，可通过分光光度法在370 nm或620-650 nm处进行定量检测。加入酸性终止液（如2M H₂SO₄）后，产物变为稳定的亮黄色，在450 nm处读取吸光度。

核心优势：

• 水溶性优异：易溶于水，无需有机溶剂助溶，使用方便，尤其适合自动化检测系统和高通量筛选。
  
• 检测灵敏度高：TMB-HCl具有极高的检测灵敏度，是ELISA和IHC实验中HRP标记检测系统的理想选择。
  
• 安全环保：联苯胺的非致癌性替代品（Ames试验阴性），使用安全，符合实验室环保要求。
  
• 显色稳定：反应生成的蓝绿色产物稳定性好，背景值低，批间差异小，结果重复性高。
  
• 应用广泛：既适用于溶液体系的ELISA检测，也适用于膜或组织切片的免疫组化染色。
  

三、主要应用领域

3.1 ELISA酶联免疫检测（核心应用）

TMB-HCl是ELISA实验中HRP标记检测系统的首选显色底物之一。其显色反应基于H₂O₂存在下HRP催化氧化TMB-HCl，产生可溶性蓝色产物，在370 nm或620-650 nm处测定吸光度。加入酸性终止液（如2M H₂SO₄）后，蓝色变为黄色，在450 nm处进行终点检测。

TMB-HCl已广泛应用于各种ELISA检测方案中，包括：

• 传染病标志物检测（如乙肝、丙肝、HIV等）
  
• 肿瘤标志物检测（如CA125、PSA、AFP等）
  
• 自身免疫抗体检测
  
• 细胞因子定量分析
  
• 食品安全中兽药残留、农药残留的ELISA检测
  

3.2 免疫组化（IHC）与免疫细胞化学

TMB-HCl是免疫组化染色中检测HRP标记探针的优良比色底物。在组织切片或细胞样本中，经HRP标记的二抗与目标抗原结合后，加入TMB-HCl底物溶液，阳性部位呈现蓝色或蓝绿色染色，可在显微镜下观察。

IHC操作流程：

1. 样本与一抗孵育（通常4°C过夜）
   
2. PBS洗涤后，加入HRP标记的二抗，孵育30分钟至1小时
   
3. 加入TMB底物溶液（TMB-HCl + H₂O₂），显色10-30分钟
   
4. 达到理想显色强度后，用终止液终止反应
   
5. 显微镜观察，目标区域呈现蓝色或蓝绿色染色
   

3.3 血红蛋白定量检测

TMB-HCl可用于定量检测血红蛋白（Hb）。在过氧化氢存在下，血红蛋白的过氧化物酶活性可催化TMB-HCl氧化显色，显色强度与血红蛋白浓度成正比。该方法灵敏度高，检测范围可达5-10,000 μg/mL，适用于临床实验室的Hb测定。

3.4 粒细胞髓过氧化物酶染色

TMB-HCl可用于染色粒细胞中含髓过氧化物酶（MPO）的颗粒，辅助白血病的鉴别诊断。髓过氧化物酶是粒细胞和单核细胞系细胞的特征性酶，其活性检测对急性白血病的分型具有重要临床意义。

3.5 Western Blotting

TMB-HCl也可作为Western Blotting中HRP标记二抗的显色底物，用于检测膜上的目标蛋白条带。显色反应在膜上产生不溶性沉淀，形成可见的条带。

3.6 反向斑点印迹（RDB）分析

TMB-HCl还可用于反向斑点印迹分析中的HRP底物，在分子诊断领域具有应用价值。

3.7 游离氯检测与环境监测

TMB-HCl可作为游离氯的光谱试剂，用于水质检测中的余氯分析。

四、检测原理

TMB-HCl的检测原理基于辣根过氧化物酶（HRP）催化的氧化显色反应：

Step 1：在HRP催化下，TMB-HCl与过氧化氢发生单电子氧化反应，生成蓝绿色的阳离子自由基中间产物。

Step 2：该产物在370 nm和620-650 nm处有特征吸收峰，可通过分光光度法进行定量检测，吸光度强度与目标物浓度成正比。

Step 3：加入酸性终止液（如2M H₂SO₄或1% SDS溶液）后，反应产物转变为黄色的二亚胺末端氧化产物，最大吸收波长变为450 nm，适用于终点法测定。

Step 4：当用于总抗氧化能力检测时，抗氧化物质会抑制TMB的氧化反应，抑制程度与抗氧化能力呈正相关。

五、产品质量标准

湖南汇百益新材料有限公司提供的TMB-HCl产品严格执行以下质量标准：

湖南汇百益通过优化合成工艺与精制技术，将产物纯度稳定控制在≥99%（HPLC检测），关键杂质含量控制在极低水平，确保显色反应的背景值低、灵敏度高。其批间稳定性控制在±2%以内，适合ELISA试剂盒的规模化生产和IVD企业的原料采购需求。

六、TMB-HCl vs. TMB游离碱：如何选择？

选择建议：

• 如果您的实验需要水相体系，或使用自动化加样系统，建议选择TMB-HCl
  
• 如果您的实验涉及膜显色（如Western Blotting），或习惯使用有机溶剂配制底物，可选择TMB游离碱
  
• 两种形式在显色性能上等效，主要区别在于溶解性和使用便利性
  

七、TMB-HCl在体外诊断产业链中的战略地位

TMB-HCl是体外诊断（IVD）试剂盒的核心原料之一，在免疫诊断领域具有不可替代的地位。

随着全球体外诊断市场的持续增长，TMB类显色底物的需求稳步上升。TMB-HCl因其优异的水溶性，特别适合自动化检测系统和液体试剂盒的配制，在IVD企业中应用日益广泛。

与传统的联苯胺类底物相比，TMB-HCl具有非致癌性的显著优势，使用安全，符合实验室环保要求，已在临床检验、法医鉴定等领域全面取代强致癌物联苯胺及其衍生物。

TMB-HCl的主要需求领域包括：

• ELISA试剂盒生产（占比约45%）
  
• IVD诊断原料供应（约32%）
  
• 临床实验室检测（约18%）
  
• 科研试剂与IHC（约5%）
  

八、供应商介绍：湖南汇百益新材料有限公司

湖南汇百益新材料有限公司成立于2014年，位于怀化市洪江工业园，拥有27,000平方米生产基地，建筑面积10,000平方米。经过多年发展，现已形成以“糖化学”“生物缓冲剂”“体外诊断试剂原材料”“高纯生物基础试剂”等为主导的，集研发、生产、销售和服务于一体的国家高新技术企业，已通过ISO9001:2015质量体系认证，并建立了自有试剂品牌——“汇百试剂”。

公司产品线涵盖千余种高纯生化试剂，包括：

• 糖苷系列：IPTG、ONPG、PNPG、DTT、x-gal、x-gluc等
  
• 生物缓冲剂：TRIS、HEPES、MOPS、CAPS、TAPS、ADA等
  
• 诊断试剂原料：ABTS、TMB、TMB-HCl、TTC等
  
• 高纯生化试剂：DEPC、TCEP-HCl、异硫氰酸胍、PMSF、MTT、BSA等
  

湖南汇百益提供的TMB-HCl产品具有以下突出优势：

• 高纯度：HPLC纯度≥99%，批次稳定性好，适合ELISA试剂盒的规模化生产
  
• 水溶性优异：产品易溶于水，使用方便，尤其适合自动化检测系统
  
• 现货供应：常备库存，支持快速发货，满足紧急生产需求
  
• 规格灵活：提供从克级到公斤级（1kg、5kg、25kg）的TMB-HCl产品，满足从科研到工业级生产的不同需求
  
• 专业包装：采用避光、密封、防潮包装，确保产品在运输和储存过程中的稳定性
  
• 技术支持：专业技术团队提供全程使用指导与问题解答
  

九、采购与使用建议

在采购TMB-HCl（CAS 64285-73-0）时，建议重点关注以下几点：

1. 纯度要求：对于ELISA试剂盒生产和IVD诊断试剂等敏感应用场景，请选择HPLC纯度≥99%的产品，以确保检测结果的准确性和重复性。
   
2. 水溶性验证：优质的TMB-HCl应完全溶于水，溶液澄清透明，无不溶物。
   
3. 批间一致性：对于试剂盒的规模化生产，批间差异是关键质量指标。选择具备严格质量控制和稳定结晶技术的供应商，如湖南汇百益新材料有限公司。
   
4. 供货稳定性：选择具备稳定供应链和可靠交付能力的供应商，确保长期稳定的原料供应。
   
5. 包装规格：根据实验用量选择合适的包装规格，常见规格包括1g、5g、25g、100g、1kg等。建议按需分装储存，避免反复冻融。
   
6. 储存条件：收到产品后请立即2-8°C冷藏、避光防潮保存，远离金属。TMB-HCl显色液配制后应在4°C避光短期保存，不宜长期存放。
   

十、联系我们

如需获取TMB-HCl（CAS 64285-73-0）的产品报价、样品或技术支持，请联系湖南汇百益新材料有限公司：

• 产品咨询：13319523173
  
• 订购邮箱：ivy@hnhbsj.com
  
• 官方网站：https://www.hbsjxcl.com/
  

声明：本产品仅供科研使用，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读产品说明书，并遵守实验室安全操作规范。