2025-07-15 10:04:34
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IPTG在双杂交系统(如细菌双杂交、酵母双杂交)中诱导诱饵/猎物蛋白表达:
原理: 双杂交系统用于研究蛋白质-蛋白质相互作用。通常一个蛋白(诱饵)与DNA结合域融合表达,另一个蛋白(猎物)与转录激活域融合表达。只有当诱饵和猎物相互作用时,才能重新组装成有功能的转录因子,激活下游报告基因的表达。

IPTG的作用:
在细菌双杂交系统中,诱饵和猎物蛋白的表达通常都受独立的、IPTG诱导的启动子(如lac或衍生物)控制。
在某些酵母双杂交系统变体中,也可能使用细菌来源的、受IPTG调控的杂合启动子(如pGAL1核心启动子融合lac操纵子)来控制一个或多个融合蛋白在酵母细胞内的表达。
加入IPTG是为了精确控制诱饵和/或猎物蛋白在特定时间点的表达水平和时机。 这有助于:
避免融合蛋白在不需要时表达(可能对细胞有毒性或影响基础生长)。
在相互作用研究开始前同步细胞状态。
进行动力学研究(不同诱导时间点检测相互作用)。
应用: 广泛用于筛选相互作用蛋白、验证特定相互作用、绘制相互作用结构域/位点图谱等。