IPTG在蓝白斑筛选中诱导β-半乳糖苷酶（LacZ）表达

IPTG在蓝白斑筛选中诱导β-半乳糖苷酶（LacZ）表达：

原理： 蓝白斑筛选是克隆筛选（如TA克隆、TOPO克隆、Gateway克隆等）中鉴定阳性重组子的经典方法。载体上含有LacZα肽段基因（lacZα），受乳糖启动子调控。宿主菌（如JM109, DH5α, TOP10）基因组上含有编码LacZω肽段的突变基因（lacZΔM15）。只有载体和宿主基因组互补（α-互补），才能形成有活性的β-半乳糖苷酶。该酶可以水解底物X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）产生蓝色产物。

IPTG的作用：

在筛选平板上，需要同时加入X-gal和IPTG。

X-gal提供显色底物。

IPTG的作用是诱导lacZα基因（在载体上）的表达。 没有IPTG时，即使空载体（含有完整的lacZα）转化到宿主菌中，由于阻遏蛋白的存在，lacZα表达水平极低，α-互补效率低，可能导致假阴性（白色菌落）或弱蓝色。加入IPTG可以确保lacZα基因得到充分诱导表达，从而进行有效的α-互补。

在插入外源片段的阳性重组子中，lacZα基因被破坏，无法产生α肽段，即使有IPTG诱导也无法形成有活性的β-半乳糖苷酶，菌落呈现白色。

浓度： 筛选平板中IPTG浓度通常较低（如0.1 mM 或 0.5 mM），足以诱导足够水平的α肽段表达即可。