CAPS环己胺丙磺酸在蛋白质免疫印记实验中需要注意什么？

环己胺丙磺酸CAPS是一种常用的生化原料，可以用作助焊剂、干燥剂、涂料中水性异氰酸酯的固化剂，在生化行业，通常作为生物缓冲剂。根据其纯度和杂质含量的不同，应用的行业也不相同。

从分子结构上看，CAPS是一种环己烷N-取代的氨基磺酸，分子量221.32，具有两性，是一种非常好的生物缓冲剂，pH缓冲范围9.7-11.1，通常被用作WB实验蛋白质PVDF转膜或硝酸纤维素NC转膜的缓冲液。

WB即western blot 蛋白质免疫印记实验，原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。实验注意事项如下：

1. SDS-PAGE电泳：与核酸杂交方法类似，只不过被检测的是蛋白质，探针是抗体，显色用标记的二抗。一般来说低分子量蛋白用Tri-Glycerine或者Tris-Tricine缓冲体系，高分子量蛋白则用CAPS缓冲系统更好。缓冲液中的甘氨酸会影响测序，所以现在测序用的转膜缓冲液是10mM/1CAPS10%甲醇。CAPS电印记缓冲液中的甲醇浓度范围是0~20%，一般甲醇浓度高的缓冲液对低分子量蛋白质的转移效果好，而甲醇浓度低甚至不含甲醇的缓冲液则有利于高分子量蛋白的转移。
   
2. PVDF膜处理时先放入甲醇浸泡几秒钟，再放入CAPS电印记缓冲液，后续操作须防止膜干涸，如果PVDF膜变干，需要重复前面步骤。电泳凝胶也需要在CAPS缓冲液中浸泡5-10分钟，有些强碱性蛋白可不用此步骤。
   
3. 转印条件通常是50V恒压、100-170mA电流强度，室温下进行电印记转移，凝胶和PVDF膜之间的气泡务必除尽，分子量较高的蛋白注意延长转移时间。
   
4. PVDF膜染色前需取出用去离子水稍微漂洗，用甲醇浸泡，然后用0.1%考马斯亮蓝染色30-50秒，50%甲醇脱色，去离子水洗涤并晾干即可。
   
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以上介绍了蛋白质印记实验需要注意的一些事项，除实验本身外，湖南汇百益提醒您，为了安全和健康，请穿好实验服并带一次性手套操作，CAPS电印记缓冲液建议选汇百益生产的优质环己胺丙磺酸配置。

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