产品概述
Biotin-HPDP是一种巯基反应性、可逆生物素化试剂,其分子由生物素基团、己二胺间隔臂与末端吡啶基二硫反应基团构成。该试剂通过二硫键交换机制选择性修饰蛋白质半胱氨酸残基的游离巯基(-SH):巯基亲核进攻吡啶基二硫,形成目标分子与生物素之间的可裂解二硫键,同时释放吡啶-2-硫酮作为离去基团。Biotin-HPDP的核心差异化价值在于其标记的可逆性:与常规不可裂解生物素化试剂不同,该二硫键可在温和还原条件(如DTT) 下被选择性切断,从而将捕获的目标分子以原始未修饰状态从亲和素载体上释放,无需使用强酸或变性剂解离生物素-亲和素复合物。此外,Biotin-HPDP具有细胞膜通透性,可用于完整细胞内巯基蛋白的标记。
核心应用
可逆亲和纯化与蛋白回收:Biotin-HPDP标记的蛋白质或肽段可通过链霉亲和素/亲和素载体高效捕获,经DTT还原即可温和洗脱,获得保持天然构象与生物活性的未修饰目标分子,适用于蛋白质相互作用研究及翻译后修饰蛋白的分离。
“生物素开关”与氧化还原信号分析:在S-亚硝基化(SNO) 研究中,Biotin-HPDP将还原后生成的巯基衍生化,把易变的氧化还原修饰转化为稳定的、可亲和捕获的加合物,用于描绘一氧化氮调控的信号节点。
酰基-生物素交换与棕榈酰化蛋白质组学:在S-棕榈酰化研究中,羟胺切断巯酯键后,以Biotin-HPDP将新生巯基标记为二硫键,实现棕榈酰化蛋白的整体或定向富集,并量化DHHC酰基转移酶通路的周转。
产品优势与关键参数
间隔臂长度:29.2 Å,属中等长度间隔臂,有效降低亲和素结合的空间位阻。膜通透性:可穿透细胞膜,适用于细胞内标记。反应条件:推荐pH 6.5–7.5的近中性缓冲液(如PBS),与还原型巯基特异性反应。溶解性:须先用DMSO或DMF配制储备液(DMSO中溶解度约2 mg/mL,可温育助溶),再稀释至水性缓冲体系。储存:-10至-25°C、干燥、避光保存。
储存与安全
本品仅用于科研。操作时请佩戴防护手套、护目镜及防尘口罩,具体安全信息请参阅产品安全数据表(SDS)。