【汇百益产品推荐】二氢乙锭（DHE）超氧阴离子检测的荧光探针

在细胞氧化应激研究中，活性氧（ROS）的检测是核心环节之一。超氧阴离子（O₂•⁻）作为ROS家族的重要成员，其水平变化与细胞损伤、增殖、凋亡及低氧响应等过程密切相关。二氢乙锭（Dihydroethidium，DHE）是一种广泛用于检测细胞内超氧阴离子的荧光探针，以其对超氧阴离子的选择性响应和便捷的活细胞标记能力，成为氧化应激研究中的常用工具。

检测原理

DHE可自由穿过活细胞膜进入细胞内部。在细胞内超氧阴离子的作用下，DHE发生脱氢反应，生成溴化乙锭（Ethidium）。生成的溴化乙锭可与细胞内的RNA或DNA结合，产生红色荧光。当细胞内超氧阴离子水平较高时，生成的溴化乙锭增多，红色荧光强度相应增强；反之则减弱。基于这一原理，DHE可用于评估细胞内超氧阴离子的相对水平。

该探针的一个显著优势在于能够辨别过氧化物与H₂O₂，在超氧阴离子的特异性检测中具有较好的选择性。

荧光特性

DHE本身发蓝色荧光，最大激发波长为370nm，最大发射波长为420nm。脱氢后与RNA或DNA结合，产生红色荧光，最大激发波长为300nm，最大发射波长为610nm。实际观察中也可使用535nm作为激发波长，便于在常规荧光检测平台上进行操作。

应用范围

DHE已被广泛用于多种细胞类型的氧化应激研究，包括NK细胞、中性粒细胞、内皮细胞、HL60细胞及巨噬细胞等。该探针还可用于鉴定肿瘤中细胞的增殖与低氧状态。在检测平台上，DHE适用于荧光显微镜、流式细胞仪及其他荧光检测仪器，可用于活细胞成像与流式分析。

操作要点

DHE可溶解于DMSO，配制成适当浓度的母液。用于细胞内超氧阴离子检测时，常用浓度为1-10μM。通常将含有0.5-5μM DHE的适当溶液与细胞在37℃孵育约30分钟，完成荧光探针装载，随后可适当洗涤，即可采用流式细胞仪或其他荧光检测仪器进行检测。

小结

DHE作为一种超氧阴离子荧光探针，通过“蓝色荧光→氧化脱氢→红色荧光”的信号转换，实现对细胞内超氧阴离子水平的可视化检测。其在多种细胞模型中的广泛应用及对超氧阴离子的选择性响应，使其成为氧化应激研究中的重要工具。

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