4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸 半钠盐 (HEPES 半钠盐) — Good’s缓冲液家族核心组分，细胞培养与生化研究即用型试剂

一、产品基本信息

二、产品简介与核心优势

HEPES半钠盐（HEPES Hemisodium Salt）是Good’s缓冲液家族中最具代表性成员HEPES的半钠盐形式，由Norman Good博士于1966年首次报道并推广应用。作为一种两性离子磺酸类缓冲剂，HEPES在生理pH范围（7.2-7.6）内具有优异的缓冲能力，被公认为生物化学和细胞生物学研究中最常用的缓冲液之一 。

HEPES半钠盐的最大优势在于其即用型特性。与HEPES游离酸需要加入NaOH调节pH才能使用不同，与HEPES钠盐（全钠盐）溶解后呈强碱性（pH 10-12）也不同，HEPES半钠盐溶解于水后pH自动约为7.5，无需任何酸碱调节即可直接作为生理缓冲液使用 。

HEPES半钠盐的核心缓冲特性基于其分子中的磺酸基团（-SO₃H），这是一种强酸性基团，可在生理pH范围内作为稳定的阴离子存在。与磺酸基团配对的是哌嗪环上的叔胺氮原子，其pKa为7.31（37°C），与生理pH 7.36完美匹配 。在pH 6.8-8.2范围内，HEPES表现出优异的缓冲能力 。

HEPES半钠盐的pKa随温度变化仅-0.014/°C，温度依赖性极小，在4-37°C范围内均可维持稳定的缓冲性能 。这一特性使其在冷藏（4°C）和培养箱（37°C）条件下均能保持一致的缓冲效果。

三、HEPES三种形式的对比分析

HEPES半钠盐的组成：半钠盐是HEPES游离酸与HEPES钠盐的等摩尔混合物，即1分子HEPES游离酸与0.5分子Na₂O结合。因此，将HEPES半钠盐溶解于水后，自然形成pH约7.5的HEPES/HEPES钠盐缓冲对，无需额外调节 。

选择建议：

• 细胞培养和常规生物化学实验：首选HEPES半钠盐，即用型，节省时间和试剂
  
• 需要精确控制离子强度的实验：选择HEPES游离酸，可精确调节Na⁺浓度
  
• 需要极高浓度或特殊配方的缓冲液：可根据需要选择合适形式
  

四、核心应用领域

一、细胞培养（核心应用Ⅰ）

HEPES半钠盐是细胞培养基中广泛采用的辅助缓冲体系，特别适用于长时间显微观察、流式细胞分选、细胞转染等需要在CO₂培养箱外操作的场景。

在常规培养体系中，碳酸氢盐依赖5-10% CO₂环境维持pH 7.2-7.4。当细胞离开培养箱时，CO₂迅速逸散导致pH急剧上升，可能引起细胞应激和功能异常。添加10-25 mM HEPES可提供额外的缓冲容量，在无CO₂条件下维持稳定的生理pH环境 。

细胞培养中的缓冲剂选择参考：

推荐终浓度为10-25 mM，常用20-25 mM。研究表明，20 mM HEPES是使用Hanks和Earle‘s溶液时的最满意浓度 。需注意超过40 mM可能对某些细胞系产生细胞毒性 。

HEPES被认为对培养细胞无毒，可提供高度水溶性和高清晰度的溶液 。其不结合镁、钙、锰(II)或铜(II)离子的特性，使其在细胞培养中不会干扰金属离子依赖的细胞功能 。

二、蛋白质纯化与生化研究（核心应用Ⅱ）

HEPES半钠盐在蛋白质研究中具有不可替代的缓冲作用。

应用场景包括：蛋白质纯化（亲和层析、离子交换层析），酶活性测定，蛋白质-蛋白质相互作用研究，核酸电泳缓冲液组分。

在电镜蛋白沉积技术中，HEPES对金属基质无影响，是优选缓冲体系 。HEPES还能防止谷氨酸结合到非受体物质上，是谷氨酸结合测定的推荐缓冲液 。在等电聚焦应用中，HEPES适用于生成<1 pH单位的窄pH梯度 。

三、IVD诊断试剂原料

在临床体外诊断领域，HEPES作为通用缓冲剂广泛用于多种生化、免疫检测试剂盒。其pKa（37°C为7.31）接近生理pH，能有效维持反应体系的pH稳定，提高检测结果的准确性和重复性。稳定、高纯度的HEPES是高质量诊断试剂的关键原料 。

四、分子生物学试剂

在DNA/RNA提取、PCR/qPCR、逆转录、分子杂交等分子生物学实验中，HEPES缓冲液可提供稳定的反应环境。在限制性内切酶消化和连接反应中，HEPES也是常用的缓冲组分 。

五、实验方案

5.1 HEPES半钠盐溶液配制

HEPES半钠盐易溶于水，推荐使用去离子水或细胞培养用水配制。

1 M HEPES半钠盐储存液配制（pH 7.5，1 L）

HEPES半钠盐的特殊便利性：由于是半钠盐形式，溶解后pH已接近7.5，通常无需任何酸碱调节即可直接使用 。如对pH有更严格要求，可用少量HCl或NaOH进行微调。

培养基补充方法：取无菌1 M HEPES半钠盐储存液，按每升培养基加入10-25 mL的比例添加，使终浓度达到10-25 mM。轻轻混匀后即可使用。添加HEPES不影响培养基原有的碳酸氢盐/CO₂缓冲体系，两者可协同作用。

注意事项：用于细胞培养时需严格无菌操作。HEPES溶液在常温下稳定，可在室温保存。

5.2 HEPES缓冲盐水（2×）配制参考

配方 ：

配制步骤：将上述组分加入水中搅拌溶解，此时溶液pH自然约为7.5。如需精确pH，可用少量酸或碱微调。过滤除菌后分装保存。

5.3 工作浓度参考

六、注意事项与安全信息

6.1 关键注意事项

光敏感性与过氧化氢生成

HEPES在可见光照射下，在核黄素（细胞培养基常见组分）存在时可产生过氧化氢（H₂O₂），对某些敏感细胞可能产生细胞毒性 。建议将含HEPES的培养基避光保存，避免长时间暴露于常规实验室照明。

浓度控制

推荐使用浓度10-25 mM。浓度过低（<5 mM）缓冲能力不足，无法有效抵抗pH漂移；浓度过高（>40 mM）可能导致细胞毒性 。某些敏感细胞系可能需要使用更低的HEPES浓度（10-15 mM），建议通过预实验确定最佳浓度。

蛋白定量实验干扰

HEPES会干扰Folin-Ciocalteu蛋白定量实验（Lowry法），但不会影响Biuret蛋白定量分析和BCA法 。进行蛋白定量时需根据方法选择合适的缓冲体系。

产品吸湿性

HEPES粉末具一定吸湿性，建议在干燥环境中称量，使用后立即密封容器，避免长期暴露于潮湿空气。

6.2 储存条件

6.3 安全信息

HEPES通常被认为是无毒、安全的实验室试剂，适用于常规细胞培养和生物化学实验。本产品仅限科研和工业生产使用，不用于临床诊断或治疗。

七、产品质量标准

湖南汇百益新材料有限公司提供的HEPES半钠盐产品严格执行以下质量标准：

湖南汇百益通过优化合成工艺与精制技术，将产物纯度稳定控制在≥99%，产品符合分子生物学和细胞培养级质量标准。每批产品均进行紫外吸收和重金属检测，确保品质稳定可靠。

八、供应商介绍

湖南汇百益新材料有限公司成立于2014年，位于湖南省怀化市洪江区工业园，拥有50,000平方米生产基地。公司是一家专注于生物基础试剂研发、生产与销售的国家高新技术企业、湖南省专精特新企业，拥有独立研发试验中心和生产基地，并已通过ISO 9001:2015质量管理体系认证。

公司先后获得“怀化市工程技术研究中心”“湖南师范大学化学生物学功能材料产学研基地”“创新创业大赛湖南省优秀企业”“湖南新材料企业”等一系列荣誉称号。

依托强大的生产平台与技术实力，公司可灵活提供OEM代工服务与个性化定制方案，如提纯、精制加工等，以满足客户多元化需求。旗下品牌“汇百试剂”，通过提供性能稳定可靠、品质媲美进口、成本更具优势的国产试剂，为生物医药、体外诊断、生物工程及科研机构等领域的客户提供基础材料解决方案。

公司研发、生产、销售各种高纯生化试剂，包括：

• 糖苷系列：IPTG、ONPG、PNPG、DTT、x-gal、x-gluc等
  
• 生物缓冲剂：Tricine、HEPES半钠盐、HEPES、MOPS、CAPS、TAPS、MES、BES等
  
• 表面活性剂与去污剂：SDS、SURFACTIN、EMPIGEN BB、CHAPS、CHAPSO、SB-8至SB-18系列等
  
• 检测试剂：泛影酸钠、G-418硫酸盐、DTE、TCEP-HCl、PMSF、PNPP、ABTS、TMB、TMB-PS、鲁米诺、异鲁米诺、ABEI、D-荧光素钾盐、NAD⁺、NADH、NADP⁺、NADPH等
  
• 高纯生化试剂：DEPC、异硫氰酸胍、盐酸胍、PMSF、MTT、BSA、WST-8等
  

湖南汇百益提供的HEPES半钠盐产品具有以下突出优势：

• 高纯度：纯度≥99%，批次稳定性好
  
• 即用型：半钠盐形式，溶解后pH自动约为7.5，无需调节即可使用
  
• 符合药典标准：产品符合国际主流质量标准
  
• 现货供应：常备库存，支持快速发货，可定制包装
  
• 技术支持：专业技术团队提供全程使用指导与问题解答
  
• 源头工厂：自产自销，具备价格优势和供应稳定性
  

九、采购与使用建议

在采购HEPES半钠盐（CAS 103404-87-1）时，建议重点关注以下几点：

纯度要求：对于细胞培养和IVD诊断试剂生产，应选择纯度≥99%的高品质产品，并关注重金属含量（≤5 ppm）和紫外吸收指标，确保对细胞的低毒性。

产品形态选择：

• HEPES半钠盐（本品）：即用型，溶解后pH自然为7.5，是细胞培养和常规缓冲液配制的首选
  
• HEPES游离酸：需加NaOH调pH，适合需要精确控制离子强度的实验
  
• HEPES钠盐（全钠盐）：需加酸调pH，适合需要高钠离子浓度的实验
  

工作浓度参考：

• 细胞培养：10-25 mM
  
• 蛋白纯化：10-50 mM
  
• IVD试剂盒：10-100 mM（根据具体方法优化）
  
• 分子生物学：10-50 mM
  

储存条件：粉末室温密封保存，避光防潮。HEPES半钠盐溶液可在室温稳定保存6个月。

光敏感性：含HEPES的培养基在光照下可能产生H₂O₂，建议避光保存。

安全操作：操作时佩戴防尘口罩、护目镜及手套，避免吸入粉尘。本产品仅限科研和工业生产使用，不用于临床诊断或治疗。

十、联系我们

如需获取HEPES半钠盐（CAS 103404-87-1）的产品报价、样品或技术支持，请联系湖南汇百益新材料有限公司：

• 产品咨询：13319523173
  
• 订购邮箱：ivy@hnhbsj.com
  
• 官方网站：https://www.hbsjxcl.com/
  
• 公司地址：湖南省怀化市洪江区工业园8号
  

声明：本产品仅供科研和工业生产使用，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读产品说明书，并遵守实验室安全操作规范。