5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷 (X-Gal) — β-半乳糖苷酶显色底物，分子克隆蓝白斑筛选核心试剂

一、产品基本信息

二、产品简介与核心优势

X-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷）是分子生物学中最经典的β-半乳糖苷酶显色底物，由杰罗姆·霍维茨及其团队于1964年首次合成。在β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）催化下，X-Gal的糖苷键被水解，释放出的吲哚衍生物迅速发生二聚反应，形成不溶性的深蓝色沉淀，在酶活性位点处产生肉眼可见的蓝色显色反应。

与ONPG和PNPG等可溶性产物底物不同，X-Gal的反应产物为不溶性蓝色沉淀，这一特性使其特别适合平板筛选和组织/凝胶染色。在蓝白斑筛选中，重组菌落（白色）与非重组菌落（蓝色）形成鲜明对比，无需任何仪器即可肉眼识别，是基因克隆实验中不可或缺的工具。

核心优势：

• 不溶性蓝色沉淀：水解产物形成深蓝色不溶性沉淀，显色强烈，对比鲜明，肉眼即可观察
  
• 蓝白斑筛选首选：与IPTG配合使用，可高效筛选重组克隆，白色菌落为阳性重组子
  
• 高灵敏度：极低酶活性即可产生明显蓝色，检测灵敏度高
  
• 背景清晰：未水解底物无色，背景干净，无干扰
  
• 经典成熟：数十年应用验证，是分子克隆筛选的“金标准”
  
• 安全性好：对细菌和细胞无毒性，可直接加入培养基使用
  

三、主要应用领域

3.1 蓝白斑筛选（核心应用）

X-Gal最广泛的应用是分子克隆中的蓝白斑筛选。该技术基于lacZ基因的α-互补原理：

原理：

• 许多质粒载体（如pUC系列、pBluescript等）携带lacZ基因的α片段
  
• 宿主菌（如DH5α、JM109等）染色体上携带lacZ基因的ω片段（lacZΔM15）
  
• 当质粒转化宿主菌后，α片段和ω片段互补形成有活性的β-半乳糖苷酶
  
• 该酶可水解X-Gal产生蓝色沉淀，菌落呈蓝色
  
• 当外源DNA插入质粒的lacZ基因区域时，α片段被破坏，无法形成有活性的酶
  
• 重组菌落无法水解X-Gal，呈白色
  

筛选流程：

1. 配制含X-Gal、IPTG和抗生素的LB平板
   
2. 转化后菌液涂布平板，37°C过夜培养
   
3. 观察菌落颜色：蓝色菌落为非重组（空载体），白色菌落为阳性重组子
   

这一方法无需特殊设备，通过肉眼观察即可快速、高效地筛选出重组克隆，是基因克隆实验的常规操作。

3.2 β-半乳糖苷酶原位染色检测

X-Gal可用于组织切片、细胞爬片或凝胶中β-半乳糖苷酶活性的原位检测。在β-半乳糖苷酶存在的部位，X-Gal水解产生蓝色沉淀，可在显微镜下观察酶活性分布。

应用场景：

• 转基因动物模型中lacZ报告基因表达检测
  
• 细胞转染效率评估
  
• 组织切片中基因表达定位分析
  
• 胚胎发育过程中基因表达时空分布研究
  

3.3 报告基因检测

lacZ是最常用的报告基因之一，X-Gal作为其显色底物，广泛应用于：

• 启动子活性分析
  
• 基因表达调控研究
  
• 增强子功能验证
  
• 转染效率评估
  

3.4 微生物检测

X-Gal可用于检测具有β-半乳糖苷酶活性的微生物，特别是大肠杆菌群的鉴定。在微生物学中，X-Gal常与其他底物联用，在同一平板上区分不同种属的微生物。

应用场景：

• 食品卫生微生物检测
  
• 饮用水大肠杆菌群筛查
  
• 环境微生物鉴定
  

四、显色原理

X-Gal的显色反应基于β-半乳糖苷酶催化的两步反应：

Step 1：酶催化水解

• 在β-半乳糖苷酶催化下
  
• X-Gal的β-糖苷键被水解断裂
  
• 生成半乳糖和5-溴-4-氯-3-吲哚基（BCI）
  

Step 2：氧化二聚显色

• 5-溴-4-氯-3-吲哚基在空气中自发氧化
  
• 两分子吲哚衍生物发生二聚反应
  
• 生成不溶性的深蓝色沉淀——5,5'-二溴-4,4'-二氯-靛蓝
  

Step 3：结果观察

• 酶活性位点呈现肉眼可见的蓝色
  
• 蓝色深浅与酶活性强度相关
  

反应特点：

• 反应特异性强，灵敏度高
  
• 产物为不溶性沉淀，显色位置精确
  
• 无需终止液，颜色可长期保存
  
• 无毒性，可直接加入细菌培养基
  

五、X-Gal vs. 其他β-半乳糖苷酶底物：对比分析

湖南汇百益提供完整的β-半乳糖苷酶底物产品线，您可根据实验需求选择：

选择建议：

• 蓝白斑筛选（平板）：首选X-Gal，不溶沉淀，肉眼可辨
  
• 组织/细胞原位染色：选择X-Gal，定位精确
  
• lacZ报告基因定量：选择ONPG或PNPG
  
• 高灵敏度定量检测：选择MU-Gal
  

六、产品质量标准

湖南汇百益新材料有限公司提供的X-Gal产品严格执行以下质量标准：

湖南汇百益通过优化合成工艺与精制技术，将产物纯度稳定控制在≥99%（HPLC检测），确保显色反应灵敏度高、背景清晰。产品批间稳定性良好，适合大规模试剂盒生产和科研使用。

七、供应商介绍：湖南汇百益新材料有限公司

湖南汇百益新材料有限公司成立于2014年，位于怀化市洪江工业园，拥有50,000平方米生产基地。公司是一家专注于生物基础试剂研发、生产与销售的“国家高新技术企业”、“湖南省专精特新企业”，拥有独立研发试验中心和生产基地，并已通过ISO 9001:2015质量管理体系认证。公司严格按照国际标准，不断完善硬件设施与质控流程，构建了全方位覆盖的精控生产体系，核心产品IPTG、DTT等高端生物原材料，质量已达国际先进水平。

依托强大的生产平台与技术实力，公司可灵活提供OEM代工服务与个性化定制方案，如提纯、精制加工等，以满足客户多元化需求。旗下品牌“汇百试剂”，通过提供性能稳定可靠、品质媲美进口、成本更具优势的国产试剂，为生物医药、体外诊断、生物工程及科研机构等领域的客户提供基础材料解决方案，以实现关键生物基础试剂国产化替代与关键试剂本土化供应，切实解决中国生物试剂的供应瓶颈问题，并持续助力科研突破与产业创新升级。

公司研发、生产、销售各种高纯生化试剂，包括：

• 糖苷系列：IPTG、ONPG、PNPG、DTT、x-gal、x-gluc等
  
• 生物缓冲剂：Tricine、HEPES、MOPS、CAPS、TAPS、MES、BES等
  
• 表面活性剂与去污剂：SDS、SURFACTIN、EMPIGEN BB、CHAPS、SB-8至SB-18系列等
  
• 检测试剂：泛影酸钠、PCA钙、G-418硫酸盐、DTE、TCEP-HCl、PMSF、PNPP、ABTS、TMB、TMB-PS、鲁米诺、异鲁米诺、ABEI、MU-Gal、D-荧光素钾盐等
  
• 高纯生化试剂：DEPC、异硫氰酸胍、PMSF、MTT、BSA、WST-8等
  

湖南汇百益提供的X-Gal产品具有以下突出优势：

• 高纯度：HPLC纯度≥99%，批次稳定性好，显色性能优异
  
• 高灵敏度：极低酶活性即可产生明显蓝色沉淀
  
• 现货供应：常备库存，支持快速发货，满足紧急生产需求
  
• 规格灵活：提供从100mg、1g到25kg/桶的多规格产品，满足从科研到工业级生产的不同需求
  
• 配套齐全：可同时提供蓝白斑筛选所需IPTG、抗生素等全套试剂
  
• 专业包装：采用避光、密封、防潮包装，-20°C冷冻运输保存
  
• 技术支持：专业技术团队提供全程使用指导与问题解答
  
• 源头工厂：自产自销，具备价格优势和供应稳定性
  

八、采购与使用建议

在采购X-Gal（CAS 7240-90-6）时，建议重点关注以下几点：

1. 纯度要求：对于蓝白斑筛选和报告基因检测，建议选择纯度≥99%的产品，以确保显色清晰度和背景干净。
   
2. 溶解性：X-Gal微溶于水，需使用DMF（二甲基甲酰胺）或DMSO作为溶剂。DMF为首选溶剂，溶解度可达20-50 mg/mL。
   
3. 储液配制：
   
4. 储存条件：-20°C冷冻保存，避光防潮。X-Gal对光敏感，长期暴露于光线下会降解。未开封粉末在-20°C下可稳定保存2年以上。
   
5. 平板制作：
   
6. IPTG配合使用：蓝白斑筛选时必须同时加入IPTG作为诱导剂，以激活lacZ基因表达。
   
7. 注意事项：
   

九、联系我们

如需获取X-Gal（CAS 7240-90-6）的产品报价、样品或技术支持，请联系湖南汇百益新材料有限公司：

• 产品咨询：13319523173
  
• 订购邮箱：ivy@hnhbsj.com
  
• 官方网站：https://www.hbsjxcl.com/
  

声明：本产品仅供科研使用，不用于临床诊断或治疗。使用前请仔细阅读产品说明书，并遵守实验室安全操作规范。