谈谈CAPS在蛋白质转膜实验中的应用

CAPS是，全称3-(环己胺)-1-丙磺酸，一种有机化学物质，白色结晶粉末，CAS号1135-40-6，是一种生物缓冲剂，常用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒。用于酶化学及HPLC分离碱性药物的缓冲液，在蛋白测序的转膜过程中应用广泛。CAPS缓冲液由CAPS、去离子水组成，调PH到11.0，用于纤连蛋白的纯化。

操作要点：

1、SDS-PAGE电泳：按常规条件进行(CAPS系统：用于>=20KD蛋白；Tris-Tricine系统：用于低分子量蛋白，也可用于高分子量蛋白)；

2、甲醇浓度：CAPS电印迹缓冲液中甲醇浓度范围是0-20%(甲醇浓度高，用于低分子量蛋白转印；甲醇浓度低甚至不含甲醇的用于高分子量蛋白的转印；

3、PVDF膜处理：取出PVDF膜，用甲醇浸泡数秒钟，然后放入CAPS电印迹缓冲液中。(注：此后的操作须防止PVDF膜干涸。如果膜变干，须重复本步骤的操作)；

4、凝胶处理：取出电泳凝胶，在CAPS缓冲液中浸泡5-10分钟。(注：转移某些强碱性蛋白pI>9.0时，可省略本步骤)；

5、安装转印槽子：将滤纸和海绵放入电印迹缓冲液中浸泡一下，然后按海绵、滤纸、PVDF膜、凝胶、滤纸、海绵的次序将电印迹夹层装好，并放入小型电转槽中；

6、转印条件：在50V恒压条件下(100-170mA)于室温下进行电印迹转移，转移时间为0.5-2小时。(注：务必排尽凝胶和PVDF膜之间的气泡。例如对70kD以上的蛋白质须延长转移时间)；

7、PVDF膜染色前处理：取出PVDF膜并用去离子水略为漂洗，用甲醇浸泡数秒钟，然后进行染色；

8、膜染色：考马斯亮蓝染色(将0.1%考马斯亮蓝R-250溶于40%甲醇/1%乙酸中)30-50秒(切勿超过1分钟)，50%甲醇脱色(勤换脱色液)，用去离子水充分洗涤，然后晾干即可；

CAPS缓冲液配制：

1、10xCAPS(100mmol/L)缓冲液配制，方法如下：CAPS，22.13g；加去离子水到900ml；用2mol/L NaOH(约20ml)将pH值调到11.0，然后定容到1L，贮存于4C。

2、CAPS电印迹缓冲液(含10%甲醇的1*CAPS)配制，方法如下：10xCAPS 200ml；加入甲醇200ml；加入去离子水1600ml即可。

其他应用：

CAPS还是制造焊接材料、空调设备和制造的原料；还用于制造烟火：用作分析试剂、热交换载体，也用于制药工业；用于空气调节、烟火、干电池；也用作助焊剂、干燥剂；针对涂料行业，用于水性异氢酸酯固化剂。湖南汇百益研发生产各种生物缓冲剂，包括CAPS、TRIS、BICINE、MOPS等，纯度高>99%，工艺稳定，欢迎各位详询。