噻唑蓝MTT的生物应用

噻唑蓝，英文名为Thiazolyl Blue，英文缩写为MTT，常温常压下为淡黄色结晶粉末，在醇类有机溶剂中有较好的溶解性。噻唑蓝是一种细胞可渗透且带正电的比色剂，具有一定的吸湿性和光敏感性，被广泛用于检测细胞中的还原代谢以及测量细胞增殖，细胞毒性和凋亡。需要说明的是该物质在活细胞中会从黄色还原为紫色的甲臜。

                                                                                图1 噻唑蓝的商品图

性质

噻唑蓝是一种含有多个富电子杂环单元的化合物，具有很强的电子亲和性和氧化还原活性。这种化合物的化学稳定性较差，主要是因为其分子结构中的富电子杂环单元容易发生氧化和其他反应。长时间将噻唑蓝置于空气环境中，容易吸潮并导致其变质。吸湿会引起噻唑蓝分子结构中的水解反应，导致其性质和性能发生变化。因此，为了保持它的化学稳定性和性能，一般要求将该物质存放在低温环境中可以减缓其分子反应的速度。

生物应用

噻唑蓝常用于基于MTT检测方法的细胞活力、细胞增殖或细胞毒性检测，因为噻唑蓝具有正电荷，它可以穿过细胞膜并被线粒体还原形成紫色甲臜染料。该物质还可用于脱氢酶的检测，生化研究中酶活力的测定。。此外，它在测定NADH2、NADPH2和心肌黄酶(Diaphorase)的生物活性中也有一定的应用。噻唑蓝的检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO )能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm或570nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶溶解所致的吸光度值与细胞数量成正比。根据测得的吸光度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞数量越多或活性越强(如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小)。经验心得，MTT实验***终吸光度应当落于0.8~1.2左右，太小检测误差占的比例较多，太大吸收值可能已经超出线性范围。

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