邻硝基苯-β-d-半乳糖苷 ONPG CAS:369-07-3 湖南汇百益厂家直销

邻硝基苯-β-d-半乳糖苷 （ONPG）是β-半乳糖苷酶的显色底物。经β-半乳糖苷酶催化后可产生黄色产物，在410－420nm波长可以检测吸光度，用于检测β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)活性。

分子结构图：     

物理化学性质

外观性状：白色结晶或结晶性粉末

溶解性：溶于水、甲醇,水中溶解度可达15mg/ml。有吸湿性

熔点：186-193 °C (dec.)

比旋光度 ：-70 º (c=1, H2O)

密度：1.6±0.1 g/cm3

溶解度 ：DMSO (Slightly), Water (Slightly, Heated, Sonicated)

水溶解性：166.5 g/L (25 ºC)

沸点：572.4±50.0 °C at 760 mmHg

蒸汽压：0.0±1.7 mmHg at 25°C

闪点： 300.0±30.1 °C

用途:

用于检测β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)活性,是β-半乳糖苷酶的显色底物。经β-半乳糖苷酶催化后可产生黄色产物,在410-420nm波长可以检测吸光度。

作用原理:

ONPG可被β-半乳糖苷酶水解为半乳糖和黄色的邻-硝基苯酚(ONP)，因此可以通过培养液颜色的变化测知β-半乳糖苷酶的活性。

体外研究：

该酶对ONPG具有高水解能力(100％),对其天然底物乳糖具有中等活性(25.7％)。然而,酶对所有其他生色硝基苯类似物的水解能力非常弱,表明Gal308是具有窄底物特异性的β-半乳糖苷酶。为了研究重组酶的动力学参数,测定了GalP8对ONPG和乳糖的Michaelis-Menten常数(Km),转换数(kcat)和催化效率(kcat/Km)。 ONPG的kcat和Km值分别为464.7±7.8s-1和2.7±0.3mM,乳糖分别为264.2±2.1s-1和7.1±0.8mM。 ONPG(172.1 s-1mM-1)酶的kcat/Km值比乳糖(37.2 s-1mM-1)高4.6倍,这清楚地表明Gal308对ONPG的催化效率要高得多而不是乳糖。

激酶实验:

使用包括ONPG和乳糖的两种底物测量β-半乳糖苷酶活性。通过遵循从ONPG释放的邻硝基苯酚的量来测量ONPG的β-半乳糖苷酶活性。反应混合物由100μL酶溶液和400μLONPG溶液（2.5g / L，在pH6.8的100mM Tris-HCl缓冲液中）组成。在78℃温育15分钟后，通过加入等体积的1M Na 2 CO 3终止反应。通过在A405测量来定量测定释放的邻硝基苯酚。一个活性单位定义为在测定条件下每分钟产生1μmol邻硝基苯酚所需的酶量。比活性表示为每毫克蛋白质的单位。在含有100μL酶溶液和5％乳糖的相同缓冲液中进行对乳糖活性的测定，并通过煮沸10分钟终止反应，并使用葡萄糖氧化酶 - 过氧化物酶测定试剂盒测定葡萄糖浓度。通过测量A492定量测定释放的葡萄糖。一个酶活性单位定义为每分钟释放1μmol葡萄糖所需的活性量。

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