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详细信息


核酸电泳常用缓冲液配制方法(一)

一、50×TAE Buffer (pH8.5)试 剂 名 称用 量终浓度去离子水至1000ml/Tris242g2MNa2EDTA•2H2O37.2g100mM

一、50×TAE Buffer (pH8.5)


试 剂 名 称

用 量

终浓度

去离子水

至1000ml

/

Tris

242g

2M

Na2EDTA•2H2O

37.2g

100mM

乙酸

57.1ml

/

配制方法:先将Tris和Na2EDTA•2H2O在800ml超纯水中搅拌溶解,后加入乙酸并充分搅拌,用超纯水定容至1L即可。


二、10×TBE Buffer (pH8.3)

试 剂 名 称

用 量

终浓度

去离子水

至1000ml

/

Tris

108g

890 mM Tris-硼酸

Na2EDTA•2H2O

7.44g

20mM

硼酸

55g

/

配制方法:先将上述试剂在800ml超纯水中搅拌溶解,再用超纯水定容至1L即可。


三、10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer

试 剂 名 称

用 量

终浓度

DEPC处理水

至1000ml

/

MOPS

41.8g

200mM

1 M NaOAc(DEPC处理)

20ml

20mM

0.5 M EDTA(pH8.0)(DEPC处理)

20ml

10mM

配制方法:

1.先将MOPS在700ml DEPC处理水中搅拌溶解,用2N NaOH调节PH至7.0;

2.再向溶液中加入NaOAc和EDTA,纯化水定容至1L;

3.用0.45μm滤膜过滤,室温避光保存。

注:溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用,但变黑时不要使用。


四、溴乙锭 (10 mg/ml)

试 剂 名 称

用 量

去离子水

至100ml

溴乙锭

1g

配制方法:

1.先将溴乙锭在100ml去离子水中搅拌至完全溶解(约数小时),后转移至棕色瓶中室温避光保存。

2.使用时的工作浓度是0.5g/ml

3.溴乙锭是一种致癌物质,须注意安全。


五、6 × Loading Buffer(DNA电泳用)

试 剂 名 称

用 量

终浓度

去离子水

至500ml

/

EDTA

4.4g

30mM

Bromophenol Blue

250 mg

0.05%(w/v)

Xylene Cyanol FF

250 mg

0.05%(w/v)

甘油(Glycerol)

180 ml

36%(v/v)

配制方法:

1.先将除甘油外的其他试剂在200ml去离子水中加热搅拌至充分溶解

2.再加入甘油180ml,用2N NaOH调节PH至7.0;

3.定容至500ml,室温保存。


六、10 × Loadlng Buffer (RNA电泳用)

试 剂 名 称

用 量

终浓度

DEPC处理水

至10ml

/

0.5 M EDTA(pH8.0)

200 ul

10mM

Bromophenol Blue

25 mg

0.25%(w/v)

Xylene Cyanol FF

25 mg

0.25%(w/v)

配制方法:

1.先将上述试剂加入有约4ml DEPC处理水的离心管中,充分搅拌溶解;

2.再加入甘油5ml,充分混匀;

3.定容至10ml,室温保存。


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