你所不知道的二硫苏糖醇 (DTT) 对荧光 qPCR 染料的影响

二硫苏糖醇 (DTT) 对荧光 qPCR 染料的影响如何？你了解吗？法医学杂志刊登了BC 哈德逊等专家的研究论文，详细研究并介绍了二硫苏糖醇 (DTT) 对荧光 qPCR 染料的影响，本文摘要了其中重点知识，为大家做出介绍：

精液样本的 DNA 提取通常利用二硫苏糖醇 (DTT) 来减少和破坏二硫键。尽管传统的提取技术在下游分析之前去除了 DTT，但法医 DNA 界***近探索了 Y 筛选、直接扩增和直接细胞裂解测定，这些测定省略了纯化，但使用还原剂来裂解精子。

本研究探讨了残留 DTT 对涉及荧光染料的下游工艺的影响。

使用 Investigator® Quantiplex HYres 进行的定量显示，与使用传统纯化方法过滤掉 DTT 时相比，当 DTT 保留在提取物中时，男性 DNA 产量显着增加 (p = 0.00056)，并且男性：人类 DNA 比率增加 > 150,000,000 倍。

当 DTT 与 Quantifiler™ Trio 一起出现时，大常染色体目标的真实平均 DNA 产量显着增加 (p = 0.038)，小常染色体、大常染色体和男性目标的平均报告 DNA 产量分别增加 1.1 倍、>9.5 倍和 1.3 倍。

两个试剂盒中添加 DTT 的 DNA 标准品受到的影响与残留 DTT 的样品类似，表明观察到的影响与 DTT 有关，而不是与提取方法有关。

这项研究证实了其他报告，即 DTT 对多种染料（例如 Cy5、Quasar 670、SYBR Green I、TMR 和 Mustang Purple®）产生不利影响。

总体而言，当与这些试剂盒结合使用时，DTT 会导致数量不准确，从而导致计算出的男女比例不准确。

因此，应避免实施包含 DTT 的新型直接 PCR 测定，或仅在仔细评估后使用 相容染料。

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