为什么ONPG(β-半乳糖苷酶)试验可以用来区分乳糖迟缓发酵？

***近经常有人提出疑问：1.为什么ONPG试验可以用来区分乳糖迟缓发酵？2.为什么国标上写明需要使用3%氯化钠三糖铁（或三糖铁）上隔夜培养物进行ONPG试验？3.副溶血性弧菌，进行OPNG试验时，按照标准为何要滴加甲苯，其作用是？

我司查阅许多资料，汇总了一下，下面与大家分享：   

原理：ONPG中文名称为邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷。ONPG可被β-半乳糖苷酶水解为半乳糖和黄色的邻-硝基苯酚（ONP），因此可以通过培养液颜色的变化测知β-半乳糖苷酶的活性。

乳糖是大多数微生物需要检测的一种糖，它代谢需要两种酶，一种是细胞通透酶，乳糖在渗透酶作用下进入细胞；一种是β-半乳糖苷酶，水解乳糖成半乳糖和葡萄糖。β-半乳糖苷酶也可以直接作用于ONPG，使之水解成为半乳糖和黄色的邻-硝基苯酚（ONP），这个作用不需要经过细胞通透酶作用进入细胞内，所以是快速的，在24h内可以完成的，甚至是乳糖迟缓发酵菌也是如此。因此解释了试验中自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种于36℃培养1-3h和24h观察结果。如果β-半乳糖苷酶产生，则于1-3h变黄，如无此酶则24h不变色。

根据上述两种酶，可以将微生物分为以下几种：

1发酵乳糖（以18-24小时）菌，具有通透酶和β-半乳糖苷酶P + G +；

2 Delayed lactose fermenters (taking longer than 24 hours) lacking permease but possessing galactosidase: P- G+.

2延迟发酵乳糖（以不超过24小时）菌，缺乏通透酶但具有半乳糖苷酶P- G +；

3 Non-lactose fermenters lacking both permease and galactosidase: P- G-.

3不发酵乳糖的菌，缺乏通透酶和β-半乳糖苷酶P- G-。

ONPG试验可用于—从非发酵乳糖菌（P- G-）中，区分迟缓发酵乳糖的菌（P- G +），如：

1 Differentiate late lactose fermenters (P- G+) from non-lactose fermenters (P- G-).

 (a) Citrobacter (+) and Salmonella arizonae (+) from Salmonella (-).

（a）亚利桑那沙门菌（G+）从沙门氏菌（G-）。

(b) Escherichia coli (+) from Shigella sonnei (-).

（b）大肠杆菌（G+）从宋内氏志贺菌（G-）。

为何试验时使用3%氯化钠三糖铁（三糖铁）上隔夜培养物进行ONPG试验？我司查阅很多资料，但都没有明确说明，只有FDA网站上，有写明“Inoculate cultures to be tested onto triple sugar iron agar slants and incubate for 18 h at 37°C (or other appropriate temperature, if required). Nutrient (or other) agar slants containing 1.0% lactose may also be used.”意思是：测试菌接种到三糖铁培养基上，37℃18h培养。营养琼脂斜面（或者其他）含1%乳糖的培养基，也可以。

因此，推断三糖铁培养基中含有乳糖，细菌经过隔夜生长，已经产生了活性良好的β-半乳糖苷酶，使用这样的菌，可以使ONPG更快的被β-半乳糖苷酶分解，试验现象更快，更好的显现。此外，滴加甲苯以及水浴5min，都是为了使β-半乳糖苷酶充分的释放出来。