IPTG诱导蛋白表达受哪些因素影响？如何优化这些因素?

IPTG诱导蛋白不成功，一般来说是受到了一些实验因素的影响，如果我们能够优化这些影响因素，那么就能获得高质量的重组蛋白。

纵观重组蛋白诱导表达过程，重组蛋白表达的影响因素分为以下三点：

①诱导时间：E.coli扩大培养之后，通过检测OD600来判断菌体数量，从而确定IPTG加入菌体开始诱导。在菌体生长的对数早期进行诱导，菌体数量较少，表达量有限；在对数晚期进行诱导，由于营养的消耗和代谢物的积累，菌体生长受到抑制，表达量下降，故一般在OD600=0.6~0.8开始诱导为佳。当然，加入诱导剂后的表达时间也需要摸索。

②诱导温度：温度与细菌生长速率相关，较高温度，细菌生长速率较高，导致发酵过程中代谢物大量积累，对细菌的生长与目的蛋白表达产生抑制，所以一般都是采取低温(16~25℃)诱导。

③IPTG的浓度。一方面，IPTG竞争性地与阻遏蛋白结合从而启动目的蛋白的转录，若IPTG浓度过低则达不到与lac阻遏蛋白结合的饱和浓度，从而不利于诱导蛋白表达；另一方面，过高浓度的IPTG会促进包涵体(IB)的形成。包涵体是指由于细菌内蛋白量太高，使得细菌蛋白质质量控制系统应接不暇，部分折叠与未折叠的蛋白分子聚集成团，很难溶解，影响蛋白质量。

那么，低温诱导蛋白表达时用多少度合适呢？举个例子，当IPTG 浓度时0.1mM 诱导时间一般24个小时 如果是冷休克载体的话是15度诱导，不同的宿主和载体可能略有差异 可以以上面数据为基点，做个一定范围的探索。

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