为什么要推广异丙基硫代半乳糖苷，IPTG有哪些优点？

异丙基-beta-D-硫代半乳糖苷简称IPTG，是一种作用极强的诱导剂,因不被细菌代谢而十分稳定,所以被实验室广泛应用。

IPTG 常用于需要诱导beta-半乳糖苷酶活性的克隆实验。它常与 X-Gal 或 Bluo-Gal 结合使用，用于重组细菌菌落的蓝白筛选，这些菌落可以诱导 lac 操纵子在大肠杆菌中的表达。IPTG 与 lacI 阻遏蛋白结合并改变其构象而发挥作用，防止 β-半乳糖苷酶编码基因 lacZ 的抑制。

IPTG 使用方法

首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液，并进行过滤除菌后保存。然后在100 ml的琼脂 培养基中，加入100 mul的上述溶液、200 mul的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 &mul的Amp(100 mg/ml)，制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基。当DNA片段插入至pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体)，然后转化至lacZ缺失细胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基，可根据长出菌体的蓝白色，而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。

IPTG 配制方法

 在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22mum滤器 过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

IPTG诱导剂优点

1.能诱导酶的合成，但又不被分解的分子，称为安慰诱导物。

由于乳糖虽可诱导酶的合成，但又随之分解，产生很多复杂的动力学问题，因此人们常用安慰诱导物来进行各种实验。

2.IPTG不被菌体代谢，为乳糖类似物，一旦进入细胞就会产生持续长久的诱导效果，所以IPTG的诱导效率高，往往只需要很少量(1mmol/L)即可达到理想诱导效果。由于IPTG不被代谢，在胞内专一诱导外源蛋白的表达。不受细胞代谢的影响，诱导效果持续稳定。乳糖有双效作用，既能做为诱导剂异乳糖的前体物质，又可以做碳源，在诱导过程中，很不稳定，IPTG因其优异的稳定性决定了它适合做实验研究用。

3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。

4.半乳糖苷键中用硫代替了氧，失去了水解活性，但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物与酶位点的亲和力相同，IPTG虽不为β–半乳糖苷酶所识别，但它是lac基因簇十分有效的诱导物。

IPTG 使用注意事项

 培养噬菌体时，Top agar中的添加量为：25 μl/3 ml(24 mg/ml)。含有IPTG 的培养基4℃避光保存，须在1~2 周内使用。IPTG需要在 2-8°C冷藏保存，配制好后保存于-20°C，室温可放置一个月，远离热源及氧化剂。

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